产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
UCF.ME? UltraNuclease ELISA Kit全能核酸酶检测试剂盒 | 36701ES59 | 1 Kit（96 Tests） |
产品描述
UCF.ME? UltraNuclease（全能核酸酶），又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶；是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。后续也可以通过相应的方法去除UCF.ME? UltraNuclease。
本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫检测（夹心ELISA）原理检测变性与非变性的UCF.ME? UltraNuclease全能核酸酶的残留，用抗UCF.ME? UltraNuclease的兔多克隆抗体包被微孔板，形成固相抗体，向固相抗体微孔板中加入UCF.ME? UltraNuclease标准品和待测样品，然后加入生物素（Biotin）标记的Anti-UltraNuclease多抗，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（SA‐HRP），形成抗体+ 抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP复合物，经过洗涤后加入TMB底物显色；TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下最终转换成黄色，颜色的深浅与样品中UCF.ME? UltraNuclease的量呈正相关。本试剂盒检测定量范围0.047-3 ng/mL；检测下限：23.5 pg/mL。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。4℃保存，未开包装的产品，一年有效。试剂打开后，有效期半年。千万不可冻存。
配置好的试剂保存时间：1）稀释后的洗涤缓冲液和稀释缓冲液，4℃保存，有效期1周；2）标准品36701-C为液体，保存于4℃，有效期1年；3）配制好的检测抗体、终止缓冲液，4℃保存，有效期1个月。
注意事项
1）试剂盒需在保质期内使用完毕。
2）禁止不同批次的相关试剂进行混用。
3）本产品仅能够应用于检测说明书中标注的靶点抗原与样本。其它应用需经使用者设计验证后，根据结果评估使用的可靠性与准确性。
4）本产品仅用于研究，不能用于临床诊断或治疗。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 规格 |
36701-A | 酶标板 | 1 Plate |
36701-B | Detection Antibody：Biotin-conjugated Rabbit Anti-UltraNuclease Antibodies | 35 μL（0.2 mg/mL） |
36701-C | Standard: UCF.ME? UltraNuclease | 1 vial（500 ng/mL） |
36701-D | HRP-conjugated Streptavidin | 10 μL |
36701-E | Dilution Buffer 1 | 45 mL |
36701-F | 20×Wash Buffer | 50 mL |
36701-G | Dilution Buffer 2 | 30 mL |
36701-H | TMB | 15 mL |
36701-I | Stop Solution | 10 mL |
使用说明
一、试剂准备
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。
1. 1×Wash Buffer配制：浓缩液平衡至室温，充分溶解，不要有结晶。混匀，取50 mL 20×Wash Buffer至超纯水中，然后定容到1 L；具体配制体积，可按照每次使用量进行配制。
2. Detection Antibody配制：使用前10000 r离心20s，然后用Dilution Buffer 2将检测抗体稀释至工作液浓度0.5 μg/mL。
3. HRP-conjugated Streptavidin配制：使用前10000 r离心20s，然后用Dilution Buffer 2以1：5000稀释至工作浓度使用。
4. 标准品曲线的配制：准备8个无菌的1.5 mL离心管，按照标准品浓度依次进行标记。移取994 μL Dilution Buffer 1至标记为3 ng/ml的离心管中，其余各管移取500 μL，根据标准品储存液浓度计算3 ng/ml标准品应移取的储液体积，加至离心管中混匀，取500 μL至下一个标记浓度的离心管中，混匀，进行一系列2倍梯度稀释标品，起始浓度标记3 ng/mL，浓度为0.047 ng/mL，可按照下面的配制方法来进行。每次试验均需制备相应的标准曲线，不同试剂盒以及不同时间的标准曲线不能混用。样本测试时，每个孔所需标品量为100 μL，注意配制体积要高于所需体积，避免体积使用量不足。
表1. UCF.ME? UltraNuclease标准品配制（酶标仪检测0.047-3 ng/mL）*
Vial | Dilution Buffer 1（μL） | 500 ng/mL UCF.ME? UltraNuclease标准品体积（μL） | 标准品终浓度（ng/mL） |
A | 994 | 6 | 3 |
B | 500 | 500 A | 1.5 |
C | 500 | 500 B | 0.75 |
D | 500 | 500 C | 0.375 |
E | 500 | 500 D | 0.188 |
F | 500 | 500 E | 0.094 |
G | 500 | 500 F | 0.047 |
H | 300 | 0 | 0=Blank |
二、实验方法
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。强烈建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。
1.试剂准备：备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2.标条确定：计算待测样本和标准品所需酶标条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存。
3.清洗酶标板：用1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板三次，拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响，确保一次拍板没有洗液残留。
4.孵育样本：加入标准品和待测样本，100 μL/孔，确保15 min内完成点样，37℃孵育1 h。
5.清洗酶标板：弃去孔中液体，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶标板。
6. Biotin-conjugated检测抗体孵育：将预先配制至工作浓度的检测抗体加入酶标板中，100 μL/孔，37℃孵育1 h。
7.清洗酶标板：弃去孔中液体，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶标板。
8. HRP-conjugated Streptavidin孵育：将预先配制至工作浓度的偶联HRP亲和素加入酶标板中，100 μL/孔，37℃孵育40 min。
9.清洗酶标板：弃去孔中液体，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶标板。
10.显色：使用前10 min将底物液恢复至室温，将底物液TMB加入酶标板中，100 μL/孔，37℃避光孵育15 min。
11.终止：加入50 μL/孔终止液至酶标板中，轻轻震动酶标板至显色均匀。
12.读值：20 min内读取450 nm的光吸收值。
三、结果分析
1. 如果待测样本OD值超出标准曲线点OD值，需将样本进行稀释后重新测定。
2. 曲线制定：根据UCF.ME? UltraNuclease全能核酸酶标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数，也可以不用减去空白孔的OD值）采用二次曲线回归拟合，绘制标准曲线（X-标准品浓度ng/mL；Y-最终的OD450 nm），推荐使用ELISACalc.exe回归/拟合计算软件。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品中全能核酸酶浓度。
附件1：标准品配置流程简图
附件2：示例数据
以下标准曲线图仅供参考，应以同次实验标准品所绘标准曲线计算标本含量
附件3：实验步骤流程简图
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HB210907