5 × Frag/Prime Buffer
产品信息
产品描述
本产品衔接Hieff NGS? Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina? (Yeasen: Cat#12251)或者Hieff NGS? Dual-mode RNA Library Prep Kit for MGI? (Yeasen: Cat#13332)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cRNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12251或Cat#13332中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free H2O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
产品组分
运输与保存方法
干冰运输，-20°C存放，效期1年。
注意事项
1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
2. Input RNA请溶于Nuclease free H2O，避免Mg2+的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为11 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
使用方法
当Input RNA是不需要片段化时，请选择方案A；当Input RNA是需要片段化处理时，请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12251或Cat#13332试剂按照表1，直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
名称 | 体积（μL） |
Input RNA | 11 |
5×RT/Frag Buffer | 5 |
Random Primer | 1 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。
表2 第一链cDNA合成反应程序
温度 | 时间 |
热盖 105°C | On |
25°C | 10 min |
42°C | 15 min |
70°C | 15 min |
4°C | Hold |
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。
表3 片段化反应体系
名称 | 体积（μL） |
Input RNA | 11 |
5×RT/Frag Buffer | 5 |
Random Primer | 1 |
Total | 17 |
B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12251或Cat#13332说明书设置合适的片段化条件。
B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。
表4 第一链cDNA合成反应体系
名称 | 体积（μL） |
Fragmented RNA | 17 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。
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产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGS? Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina? | 12251ES08//24/96 | 8/24/96 T | 3272．00/ 8372.00/ 28772.00 |
Hieff NGS? Dual-mode RNA Library Prep Kit for MGI? | 13332ES08/16//96 | 8/16/96 T | 3152.00/ 8752.00/ 36852.00 |
HB200414