UNICONTMqPCRSYBR®Gre…

UNICONTMqPCRSYBR®GreenMasterMix(抗体法,LowRox)11199ES03
产品简介
详细介绍
  • 参考报价:196 产地:上海 品牌:YEASEN 型号:11199ES03 更新时间:2024/6/3

UNICONTM qPCR SYBR? Green Master Mix

(抗体法,Low Rox

产品名称

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

UNICONTM qPCR SYBR?   Green Master Mix (抗体法,Low Rox)

11199ES03

1ml

-20避光

196.00

UNICONTM qPCR SYBR?   Green Master Mix (抗体法,Low Rox)

11199ES08

5×1ml

-20避光

586.00

产品描述

本产品是实时定量PCR扩增的预混合溶液。采用的抗体法热启动DNA聚合酶货号10113在预变性温度(95℃)加热30secUNICONTM Taq抗体失活,释放出Taq DNA Polymerase活性。抗体法热启动Taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。同时,配方优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,适合低浓度模板的扩增,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线。

Mix中含有HieffTM Taq DNA PolymeraseUNICONTM Taq抗体、SYBR? Green IdNTPsMg2+Low Rox使用时,仅需在扩增中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR,大大简化操作过程,降低污染几率。

适用机型

Applied Biosystems: 7500, 7500 Fast, ViiATM7,QuantStudio? Dx, QuantStudio?3 and 5, QuantStudio?6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000PTM, MX3005PTM, MX4000TM.

运输与保存方式

冰袋运输。-20避光储存,有效期18个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR? Green I,保存或配制反应时需避免强光照射。

注意事项

1. 解冻后Master Mix可能出现絮状物质,4℃放置并上下颠倒混匀至溶液澄清,不影响试剂性能。

2. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号11123),以有效去除RNA样品中残留的基因组。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应(推荐冰上配制)

组分

体积(μl

体积(μl

终浓度

UNICONTM qPCR SYBR? Green   Master Mix (抗体法,Low Rox)

25

10

Forward Primer (10μM)

1

0.4

0.2μM

Reverse Primer (10μM)

1

0.4

0.2μM

模板DNA

X

X

-

无菌超纯水

to 50

to 20

-

注】 使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:通常引物终浓度为0.2μM,也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。

b) 模板浓度:如模板类型为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10

c) 模板稀释cDNA原液建议5-10倍稀释,模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。

d) 反应:推荐使用20μl50μl,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

扩增程序(两步法)                               扩增程序(三步法)

循环步骤

温度

时间

循环数

 

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95

30sec

1

 

预变性

95

30sec

1

变性

95

10sec

40

 

变性

95

10sec

40

退火/延伸

60

30sec

 

退火

55-60

20sec

熔解曲线阶段

仪器默认设置

1

 

延伸

72

20sec

 

 

 

 

熔解曲线阶段

仪器默认设置

1

【注】:高特异性可选择两步法,扩增可选择三步法。

a) 预变性时间:本反应条件适合大多数基因扩增,如果遇到含有复杂结构的基因可适当增加预变性时间至3-5 min

b) 退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。

c) 荧光信号采集(:请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

30sec以上:Applied Biosystems: StepOneTM, StepOne PlusTM, 7500 FastRoche Applied Science: LightCycler? 480Bio-Rad: CFX96TM

31sec以上:Applied Biosystems: 7300

34sec以上:Applied Biosystems: 7500

d) 熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。

1) 扩增曲线:标准扩增曲线为S型。

Ct落在20-30之间时,定量分析最准确;

Ct值小于10,需要将稀释模板后,重新进行实验;

Ct值介于30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性;

Ct值大于35时,检测结果无法定量分析基因的表达量,但可用于定性分析。

2) 熔解曲线:

熔解曲线单峰,表明反应特异性好可以进行定量结果分析;若熔解曲线出现双峰或者多峰,则不能进行定量分析。

熔解曲线出现双峰,需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。

如果是引物二聚体,建议降低引物浓度,或者重新设计扩增效率高的引物。

如果是非特异性扩增,请提高退火温度,或者重新设计更高特异性的引物。

引物设计指南

1)推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳,可以在100bp-300bp内选择。

2)正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2。引物Tm60-65为佳。

3)引物碱基分布要均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最hou一个碱基为GC

4)引物内部或者正反两条引物间避免出现有3个碱基以上的互补序列。

5)引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。

6)设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

相关产品

产品名称

货号

规格

促销价(元)

HifairTM   II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus)

11123ES60

100T

955

HieffTM   qPCR SYBR? Green Master Mix (No Rox )HOT

11201ES08

5ml

498

HieffTM   qPCR SYBR? Green Master Mix (Low Rox Plus) HOT

11202ES08

5ml

498

HieffTM   qPCR SYBR? Green Master Mix (High Rox Plus) HOT

11203ES08

5ml

498

HieffTM   qPCR SYBR? Green Master Mix (Rox Provided Seperately) HOT

11204ES08

5ml

740

UNICONTM   qPCR SYBR? Green Master Mix    ( 抗体法,No Rox) HOT

11198ES08

5ml

586

UNICONTM   qPCR SYBR? Green Master Mix    ( 抗体法,Low Rox) HOT

11199ES08

5ml

586

UNICONTM   qPCR SYBR? Green Master Mix    ( 抗体法,High Rox) HOT

11200ES08

5ml

586

HB180706

 


单位名称:翌圣生物科技(上海)股份有限公司
详细地址:上海市浦东新区天雄路166弄1号楼402室
QQ:4006111883
联系手机:
联系电话:
我要咨询:我要咨询
传真:021-34615995
Email:wuchufeng@yeasen.com