Amplite荧光法天门冬氨酸转…

Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测AST的试剂盒，天冬氨酸氨基转移酶（AST），也称为血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶（GOT），是转移酶家族的成员。它催化天冬氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移，是氨基酸代谢中的重要酶。AST存在于许多身体组织中，例如肝脏，心脏，肌肉，肾脏，脑。在健康受试者中，血清AST水平低。然而，当细胞受损时，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黄疸，肝癌，心肌梗塞，AST可能会渗入血流并且AST水平显着升高。因此，血清AST水平的测定具有重要的临床和诊断意义。

Amplite 荧光天冬氨酸氨基转移酶（AST）检测试剂盒为各种生物样品中AST的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 天冬氨酸转氨酶催化天冬氨酸和α-酮戊二酸与草酰乙酸和谷氨酸的反应：

天冬氨酸（Asp）+α-酮戊二酸＝草酰乙酸+谷氨酸（Glu）

通过酶偶联反应循环产生红色荧光产物来测量产物L-谷氨酸。可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（佳Ex / Em = 540nm / 590nm）下读取信号。使用Amplite 荧光天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到低至2 mU / mL的AST。该测定是稳定的，并且可以容易地适用于各种各样的应用。百萤生物是AAT Bioquest的代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例

概述

准备AST反应混合物（50μL）

加入AST标准品或测试样品（50μL）

孵育于37℃，20-30分钟或室温，60分钟

在Ex / Em = 540 / 590nm处监测荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻组分A和B各一瓶。

操作方法

1.准备AST标准品的连续稀释液（1至300 mU / mL）：

1.1向DPBS缓冲液中加入所需量的AST阳性对照，制成100 U / mL AST标准溶液。

注意：未使用的AST阳性对照（组分D）应存储在4℃。 不要冻结。

1.2将3μL100U / mL AST标准溶液（来自步骤1.1）加入含0.1％BSA的997 L DPBS缓冲液中，得到300 mU / mL AST标准溶液。

1.3取300μL300mU / mL AST标准溶液进行1：3连续稀释，得到AST标准品的100,30,10,3,1,0.3和0 mU / mL系列稀释液。

1.4如说明书中的表1和2中所述，将AST标准品和含有AST的测试样品的系列稀释液加入到实心黑色96孔微量培养板中。

注意：如果需要，将测试样品稀释至含有0.1％BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。

2.准备AST测定混合物：

2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶（组分C）中，得到100X NAD溶液。

2.2将10 mL AST测定缓冲液（组分B）加入AST Enzyme Mixture瓶中（组分A），并充分混合。

2.3将整瓶100X NAD溶液（来自步骤2.1）加入到AST Enzyme Mixture溶液中（来自Step2.2）使用AST测定混合物。

注意1：该AST测定混合物足以用于两个96孔板。 在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注意2：或者，可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50倍的AST酶混合物原液，然后通过将原液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD混合制备AST测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X AST Enzyme Mixture储备液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃，避免冻融循环。

3.运行AST测定：

3.1将50μL的AST测定混合物（来自步骤2.3）加入AST标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1.4），使得总AST测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLAST测定混合物。

3.2将反应在37°C下孵育20-30分钟或在室温下孵育60分钟，避光。

注意：空白控制的背景随着时间和温度的增加而增加。 如果在37℃下孵育30分钟，背景将很高。

3.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（佳Ex / Em = 540 / 590nm，在570nm处截止）。