2010 版中国药典对胰岛素在高分子蛋白质检查项中做出了更高的要求,色谱柱填充剂由 05 版的葡聚糖凝胶 G50 改为分辨率更高的 3~10m 亲水性硅胶,如下:“取胰岛素样品适量,用 0.01mol/L 盐酸溶液制成每1ml 中约含 4mg 的溶液,作为供试品溶液。以亲水性改性硅胶为填充剂(3~10m),冰醋酸‐乙腈‐0.1%精氨酸溶液(15:20:65)为流动相;流速为每分钟 0.5ml;检测波长为 276nm。取胰岛素单体‐二聚体对照品(或取胰岛素适量,置60℃放置过夜),用 0.01mol/L 盐酸溶液制成每 1ml 中约含 4mg 的溶液,取100ul 注入液相色谱仪,胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。取供试品溶液100ul,注入液相色谱仪,记录图谱。除去保留时间大于胰岛素峰的其他峰面积,按峰面积归一化法计算,保留时间小于胰岛素的所有峰面积之和不得大于1.0%。”同时药典规定,按上法对于中性胰岛素注射液的检测不得大于2.0%,对于精蛋白锌胰岛素注射液的检测不得大于3.0%。
赛分科技SRT(5um)系列及Zenix(3um)系列色谱柱采用的固定相是以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质,表面键合一层均一、亲水、纳米厚度的中性聚合物薄膜,与生物分子等之间的非特异性相互作用非常小。
从上面的谱图看出,赛分科技SRT SEC-150 款体积排阻柱非常适用于胰岛素高分子聚合物的检测,效果明显优于目前市场上知名品牌T 对应款的色谱柱。