目前氨甲喋呤的检测方法多采用反相C18添加乙胺-乙酸梯度洗脱， 保留时间长、 灵敏度低； 使用HILIC方法采用低浓度挥发性的醋酸铵做流动相，可以在不降低灵敏度的情况下利用 LC-MS 等手段实现快速分析，为肿瘤药物临床代谢研究提供了便利。下图为使用 HILIC Polar-Imidazole 色谱柱对氨甲喋呤的检测图谱,其中，氨甲喋呤保留时间在 5min 之内，LLOQ达到 0.05uM，且只需要简单的等度洗脱即可，非常适合氨甲喋呤的分析。
Column: Polar-Imidazole (5 um, 120 ?, 4.6×150 mm)
(订货号： 135335-4625)
Mobile phase: ACN:10 mM NH4Ac=90:10 （V/V）
Flow rate: 1.0 mL/min
Wavelength: 214 nm
Column tem.: RT
Injection Volume: 20 uL