心肌肌钙蛋白的检测方法

实验技术

心肌肌钙蛋白的检测方法
发布时间 2007/5/25 点击 4721 次

cTn可以用高度敏感的酶免疫法(ELISA)作定量检测，也可用快速的固相免疫层析法作定性检测。在正常标本中运用现有的方法检测不出cTnT和cTnI。因此，循环血中出现任何一种可检测到的cTn必然是心肌细胞受损的结果。 1.cTnT的检测方法 cTnT的ELISA分析法最早于1989年报道。第一代cTnT ELISA分析法(cTnT 1)商品化试剂于1992年进入市场。cTnT 1使用两种肌钙蛋白T特异的单克隆抗体-心肌肌钙蛋白T特异抗体M7为捕捉抗体和肌钙蛋白T特异抗体1B10作为标记抗体，使cTnT 1的敏感性较最早的ELISA分析法高5倍。但临床应用表明cTnT 1对患有严重骨骼肌损伤病人会产生假阳性。1997年第二代cTnT ELISA分析法(cTnT 2)商品化试剂问世。cTnT 2使用高度心肌特异的抗体M11.7取代了cTnT 1中与骨骼肌有交叉反应的抗体1B10。与cTnT 1相比较，cTnT 2具有相同的诊断敏感性和更高的心肌特异性，分析时间则由原来的90 min降低到45 min而不影响分析的准确性和临床特异性，因此在临床实践中cTnT 2已取代cTnT 1。第三代cTnT分析法(cTnT 3)生产的试剂也已于最近进入市场。cTnT 3运用重组人基因技术代替cTnT 2的牛血清，在增加特异性和灵敏度的同时，测定的线性范围达25 μg/L，分析时间缩短到＜20 min。用于检测cTnT的快速诊断试剂盒已经问世，由原Boehringer Mannheim公司专利生产，并能做到定量检测，与cTnT ELISA之间有较好的相关性(r＝0.98；y＝0.85x＋0.002)。 2.cTnI的检测方法定量检测cTnI的方法很多。最早使用多克隆抗体检测的放射免疫法。随后，相继报道了运用单克隆抗体检测的各种不同的酶免疫法。鉴于cTnI作为心肌损伤的诊断标志物的重要性，各试剂生产厂商先后推出各自的cTnI检测系统，并且在临床广泛应用。临床化学家对各种cTnI检测系统的测定结果之间的可比性十分关注。鉴于Dade Stratus Ⅱ检测系统是第一个通过美国食品和药物管理局(FDA)批准的cTnI检测系统，许多临床研究报道］了其他cTnI商用分析系统与之相比较的结果。美国临床病理学会(CAP)在1997年对检测cTnI的Access、Opus Plus和Stratus Ⅱ三个系统进行调查，结果发现平均cTnI浓度根据使用的分析系统而有实质性的不同。Access的测定值最低，有些甚至比Opus Plus结果低20倍。这些极端结果采用Dade Stratus Ⅱ分析系统测定，结果大约是Opus Plus分析法的1～3倍。进一步的研究发现］，Stratus和Opus所用抗体的识别点位于cTnI的氨基末端，而Access所用抗体的识别点则位于cTnI的羧基末端。相对而言，血中cTnI的氨基末端较稳定，较少降解，这可能是引起测定结果变异的重要因素之一。此外，采用全血或血浆标本时的某些抗凝物质(如EDTA)也会对检测产生影响。EDTA螯合血标本中的钙离子，使cTnI-cTnC复合物解离，游离cTnI单体形成增加，从而影响检测值。由于cTnI分析法和分析系统之间存在着很大绝对的和相对的误差，许多有识之士提出应对cTnI分析法进行标准化，以使cTnI的检测结果具有可比性。Wu等人［7］提出了三点建议：一是统一参考材料，其次是统一抗体。各种cTnI分析法中的抗体因为其针对cTnI分子不同的抗原决定簇而各不相同，只有标准化了所使用的抗体后，测定结果才可能会有可比性。第三是统一操作步骤。用于检测cTnI的快速诊断试剂盒也有多种，与定量检测存在的问题相同，由于各种试剂盒出自不同的试剂厂商，缺乏方法上的标准化，其测定值的可靠性同样值得关注。 3.cTnT或cTnI的临床应用选择］ cTnT和cTnI作为心肌损伤时释放的结构蛋白，在临床应用中各具特点。对cTnT的争议在于肾功能衰竭病人和各种肌病病人的cTnT有非特异性上升，虽然其机制至今尚无定论。就方法学而言，第二代cTnT检测法在第一代检测法的基础上有了很大的改进，几乎完全排除了分析法的交叉反应。由于仅有一个生产厂商拥有cTnT的生产专利，因此不存在方法间的标准化问题。与此相反，对cTnI的争议在于检测中的各种问题，如分析物的低稳定性、防腐剂的影响、纤维蛋白原的干扰和血清(浆)中的嗜异性抗体(HA)及类风湿因子导致cTnI的假阳性上升等，特别是不同生产厂商的cTnI检测试剂不同造成的检测结果不一致等等。cTnI检测值的不同将直接影响对众多临床问题的解释，如AMI的发作时间、梗死面积、再灌注的评估以及心肌损伤危险性的分类等等。用cTnI取代CK-MB作为心肌损伤的诊断标准时，必须认识到不同的cTnI检测方法有着不同临界值、对众多的临床问题有不同的解释，这一点应该引起临床医生充分重视。因此，不少专家认为，用现有方法检测出的cTnI和cTnT应作为独立的临床标志物用于AMI的诊断中
[来源：来宝网]

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