摘要:血浆氧化酶是嗜中性粒细胞在急性心肌梗塞或心肌缺血时释放的一种活性物质。血浆氧化酶活性(PlasmaOxidaseActivity,POA)测定对急性心肌梗塞(AMI)的早期诊断有意义。Lasala等[1.2]的研究指出,POA测定在初入院的病人中对AMI的诊断灵敏度为95%,大大高于CK~MB的54%。虽然由于POA在急性感染病人中也显著增高,因而降低了其特异性,但只要排除了急性感染,其特异性还是相当满意的。因此POA可望成为有胸痛但无急性感染证据的AMI或缺血性病人的一种灵敏的筛选方法。已报告的POA测定方法,血液用量大,需用特殊试剂作标准曲线定量,因而无法在临床实验室中实际应用,我们根据临床实际情况,对方法进行了改良,减少了用血量,采用摩尔消光系数法计算结果,使之能在一般实验室中应用,现将结果报告如下。
材料与方法
一、材料:
1、100mmol/L盐酸肾上腺素:称取 L-Aldrenaline( MW=183.21,Fluka产品)183.21毫克,加适量盐酸溶解,准确加水至10ml,用黑纸包裹,4℃保存备用。
2、注射器式微孔滤膜滤器及0.3um和0.65um二种滤膜,直径25mm,上海医药工业研究院产品。
3、751-G型分光光度计,上海分析仪器厂产品。
二、方法:
1、标本处理:静脉取肝素抗凝血3~4ml,立即离心2000rpm20分钟,分离血浆。在注射器式微孔滤膜滤器中加0.3um和0.65um滤膜各一张,拧紧密封后吸取全部血浆,缓慢推压针筒使血浆经滤膜滤过后盛于试管中,立即测定POA或4℃保存备用。
2、POA测定:取泸过后血浆1.0ml,加蒸馏水1.0ml混匀,于分光光度计480nm处,0.5cm比色皿,以蒸馏水为零点测定吸光度A1,此为空白管。然后在试样中准确加入100mmol/L盐酸肾上腺素50ul,37℃保温2小时整,再按空白管测定条件测得480nm处吸光度A2,此为测定管。A2-A1=测定吸光度,用于POA计算。
3、单位计算:在上述实验条件下,血浆氧化酶转化1umol的肾上腺素为1umol的肾上腺素红为1单位,结果以U/L报告。文献报告[1.2]血浆氧化酶在上述试验条件下,480nm,1.0cm比色皿的摩尔消光系数为4020,因此计算公式为:(A2-A1)×2.0×10/4020×0.5×1.0=(A2-A1)×995=U/L
结果和讨论
炎症时嗜中性粒细胞进入组织产生局部组织浸润,并可氧化肾上腺素为肾上腺素红,在分离的组织液中也保留有这种氧化能力。这种血浆氧化酶在AMI和缺血性心脏病时也以较高浓度出现在血浆中,虽然其作用尚不清楚,但它作为一种天然防御机制,可对抗内源性肾上腺素,从而降低室性心律不齐发生的可能性。发生AMI或心肌缺血时,血浆氧化酶作为早期指示物,可立即测出其血浆活性的升高,其出现的时间早于CK和CK-MB。随着溶栓术等AMI治疗技术的进展,早期诊断早期治疗越来越受到重视,血浆氧化酶有可能成为早期诊断的一个重要指标。此外,血浆氧化酶也有助于鉴别心绞痛和AMI。血浆氧化酶原报告方法用血量大,需肾上腺素红作标准曲线才能得出结果。考虑到原法每一次需取血10ml,病人不易接受,肾上腺素红昂贵且需进口,不易购得等情况,我们对原法进行了改良,为减少用血量,同一管血既作空白管,又作测定管,同时用0.5cm比色皿比色;用摩尔消光系数法计算结果,而不用肾上腺素红试剂,使之适用于普通实验室。我们用本法测定了健康体检者86例,年龄范围42~65岁,平均年龄53岁。POA范围68.7~198U/L,均值119U/L,标准差21.3U/L。测定了AMI病人4例,POA范围157.2~273.6U/L,均值197.4U/L,标准差24.7u/l。测定了感染病人20例,POA范围148.3~189.1U/L,均值为169.1U/L,标准差为17.1U/L。从结果分析,与文献报告有一定差别。文献报告[1]正常人测得范围为84U/L±5u/L,我们的结果比文献偏高。可能原因有二方面,一是所用盐酸肾上腺素试剂不同,原法用Sigma产的盐酸肾上腺素,我们用的是Fluka产的肾上腺素;二是751-G分光光度计灵敏度和精密度较低,可能也有一定的影响。文献报告[1]感染病人和AMI病人测得结果分别为214±10U/L和233±13U/L,我们的结果相对偏低,可能原因与标本采集时间有关,这些病人标本都不是初入院时采集的,而是入院后2~5天的标本检测的结果。本法目前还比较粗糙,比较简单,还存在用时较长,用血较多,反应终点未能有效终止等缺点,有待于今后工作中进一步研究。有关AMI病人、感染病人与正常人比较的详细资料尚有待进一步工作。本文为今后这一方面的研究提供了实用的方法。