摘要:目前血尿酸测定多数实验室均采用磷钨酸还原法,由于需要制备无蛋白滤液,使方法变得繁杂,加之尿酸在酸性条件下极不稳定,会因操作使其与蛋白产生共沉淀而影响结果,我们以表面活性剂为增溶剂用血清标本直接测定,具有简便、快速、准确,适合常规应用,现将方法与结果报告如下。1材料与方法:
1.1试剂
1.1.1碱性溶液内含氢氧化钠和适量表面活性剂。
1.1.2磷钨酸试剂称取不含钼的钨酸钠5g,溶于约40ml蒸馏水中,加浓磷酸(85%)4ml混匀,放入250ml输液盐水瓶内,置高压消毒器内37.9Pa20分钟2次,冷却后加蒸馏水至1L,置棕色瓶内保存。
1.1.3尿酸标准液定值血清尿酸含量368.5umol/L(上海生研所产品,批号990501)。
1.2方法
取三支试管分别标明(U)、(S)、(B)顺序加入血清、标准、蒸馏水各0.1ml,每管加碱性溶液2.5ml,充分混匀后,各加磷钨酸试剂0.5ml混匀,37℃水浴箱10分钟,取出用722数显分光光度680nm波长,光径10mm,空白管调零读取各管吸光度A。
1.3结果计算:血清尿酸(umol/L)=AU/AS×368.5
2结果与讨论
2.1吸收光镨取一份定值血清,用本法操作,从500-730nm,测其吸收曲线,吸收峰为680nm。
2.2线性范围自配一糸列浓度尿酸定值血清,经实验结果表明尿酸在0-1200umol/L范围内线性良好。
2.3重复性试验同一血清进行重复(批内、批间,n=20)试验,结果(x±sumol/L,cv)批内387±14,3.61%;批间382±16,4.18%。
2.4回收试验取已知测定值血清分别加入一定量的标准液,测定其回收率,回收率为98.6-103.4%,平均回收率为101%。
2.5干扰试验经试验Hb达1g/L,TBi达100umol/L对本法无干扰,脂血有干扰,如遇脂血标本,可用蒸馏水代替磷钨酸试剂作一标本空白即可消除混浊干扰。
2.6温度对显色影晌取定值血清用此法测定,分别置室温(20℃),37℃水浴,结果表明37℃水浴较室温显色好。
2.7显色稳定性观察将显色液分别放置10、20、30、60、90分钟,结果在30分钟内显色稳定。
2.8本法与原法做30例对照,结果经t试验,t=0.645,p>0.05,结果无显著性差异。
2.9参考值本文测定120例正常人血清,其中男性60例,女性60例,年龄20-60岁,结果呈正态分布,以95%范围计算,男:234.6-448.8umol/L,女:168.6-390.5umol/L。
2.10基质效应基质效应是尿酸标准液中的一个重要问题,实验中我们发现,如果以水为基质配制的标准液显色后很不稳定,计算出的结果要高于实际浓度,因此本文采用定值血清作为标准。
参考文献
1叶应妩主编.全国临床检验操作规程.第一版.南京:东南大学出版社.1991:232
2杨林et al.中华医学检验杂志,1989;12(1):1
3杨树德et al.中华医学检验杂志,1989;12(2):66