随着自动化分析仪在各医院的普及，酶的连续监测法测定已成为临床酶活性测定的常规方法。但在实际工作中，由于所用的仪器种类繁多，试剂盒品种不一，实验室工作人员业务能力的差异等，造成不同实验室间的测定结果差异较大。本文就酶活性测定的质量保证和标准化作一些探讨，现报告如下。
1试剂的质量保证
1.1 试剂盒的选择 目前酶测定大多使用商品试剂盒，由于酶促反应的影响因素较多，造成各实验室间酶活性结果差异较大。为了提高酶活性测定的准确性和精密度，使酶活性测定结果在方法间、实验室间具有可比性，消除参考范围的多重混乱，国际临床化学联合会（IFCC）提出了多种酶测定的推荐方法。我国检验学会也公布了一些酶的推荐方法。当前酶试剂盒生产厂较多，在选购试剂盒时要仔细阅读试剂盒说明书，对试剂盒所用方法的原理、试剂配方（包括缓冲液、底物、添加剂等）有所了解，选择卫生部临床检验中心推荐的常规方法的试剂盒。有些项目没有推荐常规方法，应该选择公认的测定方法试剂盒。
1.2 试剂盒的性能监测
1.2.1 试剂盒性能监测的重要性：酶试剂盒有许多生产厂家，不同厂家产品的质量、技术含量等常有区别，有时即使同一厂家不同批号的同种试剂因原料来源、纯度不同以及生产条件变动，会产生批间变异。同一批号的同种试剂盒在储存、运输时的情况有所不同，性能也可能发生变化。因此对购人的试剂盒应进行性能检测，只有质量达到标准方可用于实际工作。
1.2.2 试剂盒性能检测的具体方法：总的原则应不低于《卫生部临床检验体外诊断试剂盒质量检定暂行标准》的规定。同项目试剂盒之间作比较，如果稳定性好、线性范围宽、正向型试剂空白吸光度低、反向型试剂空白吸光度高、试剂空白速率低、瓶间差小者可视为优质试剂。
2 自动生化分析仪的质量保证
2.1 加样系统的质量保证 自动生化分析仪在长期使用过程中，因试剂针受腐蚀和管道老化、注射器加样精度下降等，均可导致加样系统的精密度下降，因此必须定期检测加样的准确度和精密度，也可用称量法检测加样的准确度和精密度。根据测定结果查找准确及精密度欠佳的原因，作相应的维护和保养。
2.2 摩尔吸光系统繁荣校准 自动生化分析仪测定酶活性是割据摩尔吸光系数计算出酶的活性单位。在实际应用中，不同厂商的不同仪器以及同一仪器的不同时期都使用统一的ε值。文献所载各ε值是以窄光谱、低杂散光的高级分光度计检测所得，而在临床化学检验的实际应用中，分析仪器的干涉或光栅分光的波长宽度常为6~10nm，其检测系统的性能也不一致，因而被检测物质在各仪器上使用时的实际ε值也就不一致，如各仪器都使用统一的ε值计算，则可能导致测定结果的偏差。
2.2.1 340nm波长摩尔吸光系数的校准：NAD(P)H是酶活性测定中最常用的指示辅酶，它在340nm波长、比色杯光径1cm时摩尔吸光系数为6220。由于NAD(P)H没有标准纯品，而且在水溶液中极不稳定，故一般实验不能直接用NADH标准液来校正仪器，必须通过有NAD(NADP)参与的反应途径。用已糖激酶（HK）法则定葡萄糖标准液时，葡萄糖的消耗与NADH的生成是等摩尔关系。因此，根据葡萄糖标准管理的吸光度，可以计算出NADH（NADPH）的摩尔吸光系数。具体办法可参考吴文俊等的报告。如果6000＞ε＞6600为不合格，则需找维修部检查。
2.2.2 405nm波长摩尔吸光系数的校准：最常用的色素原为对硝基苯酚，在波长405nm、光径1cm、温度37℃时对硝基苯酚的摩尔吸光系数为18700。可用ALP测定试剂的缓冲液作为测定试剂，对硝激苯酚标准液作为血清标本，实际测定405nm的吸光度值，根据对硝基苯酚的浓度可计算ε值。如果ε值偏差过大，则需找维修部检查。
3 关于测定温度 影响酶活性测定精确性的一个重要因素是测定温度，也就是说在不同温度时所测得的酶活性是不一样的，测定温度的选择长期未统一，我国已将酶活性测定温度统一为37℃，所用温度的误差不能大于0.1℃。IFCC推荐法的测定温度也由过去的30℃最近改为37℃。因此酶活性的测定温度统一采用37℃。
4 酶活性测定的校准 动力法测定酶活性，各试剂生产厂商都提供了相应的计算因子，这是根据测定程序中样品用量和反应体积比例，以理论摩尔吸光系数计算出来的，称之为理论K值。由于在实测ε值时使用了分析仪的加样系统，加样误差已包含在K值中。用校准K值作为分析参数测定酶，可使不同仪器间测定结果具有可比性，提高酶活性测定结果的准确性。
5 用酶校正物进行酶活性的校准 使用公认的酶校正物进行酶活性测定结果的校准，是国际上最近提出的酶测定标准化新途径。
5.1 使用酶校正物的优点 除具有实测ε值换算出的校准K值所具有的一切优点外，还可促进方法间的一致性和增加常规酶方法的可靠性，可使不同实验室之间的测定结果相对统一。
5.2 酶校正物的使用方法 使用公认的酶校正物按说明书使用，作为待测样本进行7~10次重复测定，取其均值作为校准前测定结果C1，酶校正物的标定值为C，通过以下计算公式，可得出校准K值。
K2=
C1:校准前酶校正物的测定结果；C:酶校正物的标定值；K1：理论计算因子；K2：校准后K值。
用校准后K值作为分析参数进行酶活性的测定。
5.3 酶校正物的选择 由于一级校正物价格昂贵，常规工作一般选用用于常规实验室的工作校准品，目前临床常规实验室应用较多的是德国宝灵曼公司的校准品（c.f.a.s）.
5.4 生化分析仪在长期使用过程中，滤光片与加样系统的精度都可能发生变化以及光学系统的灯泡老化、光电转换元件的灵敏度变化等，都会导致测定结果的偏差，所以最好每半年进行一次酶活性的校准。
但日常工作中，遇到下列情况发生时，必须进行校准：⑴改变试剂盒的厂家，或者更换了批号。⑵仪器进行一次大的预防性维护或者更换可重要部件，这些都可能影响检测性能。⑶质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时。
6 酶活性测定的质控 由于酶的影响因素较多，因此，开展酶活性测定的质量控制较困难，但显得更为重要。选择质控血清时以进口质控血清为最佳，其优点是稳定可靠，但价格昂贵。目前上海生物制品研究所生产的19种临床化学项目的质控血清包括了常用的酶类，我们认为稳定性尚可，价格又便宜，适合我国临床实验室特别是中、小型实验室使用。
7 优秀的实验室人才 除临床检验“四要素”——仪器、试剂、方法学和人外，还应不断加强酶学基础理论的学习，理解各分析参数的确切意义，根据大量的实践科学地设置分析参数，努力提高酶学测定的水平