国家口蹄疫参考实验室是在中国农业科学院兰州兽医研究所原口蹄疫研究室基础上组建,于2002年11月由农业部发布命名。该室始建于1958年。建室以来,一直从事口蹄疫和猪水泡病的诊断检疫、流行病学监测、免疫预防和病原生物学研究以及技术产品的开发推广工作,拥有毒种库、血清库及其数据库,其研究成果为国家制定口蹄疫防制策略提供了科学依据,技术和产品已成为我国预防口蹄疫的重要手段。在科研成果、人才培养、技术产品开发等方面取得了丰硕成果,已成为全国口蹄疫科研、诊断监测、咨询及技术开发中心。该室现有在职科研人员41人,其中研究员4人、副研究员11人,具有博士学位者8人、在读博士9人,硕士学位者21人,另有客座和特聘研究员8人。实验室设施先进,拥有万元以上仪器设备近千台(件),1990年被批准为农业部重点开放实验室。建室以来,先后建立了6项与国际接轨的口蹄疫诊断检疫方法,此外还建立了4种适合国内应用的检疫方法。在免疫预防研究方面,迄今研制成功了我国几乎全部的口蹄疫预防用疫苗品种。多年来,以上诊断检疫技术和疫苗在我国口蹄疫防制中发挥了重要作用。在流行病学研究和疫情监测方面,成功绘制出口蹄疫病毒系统发生树,搞清了病毒的遗传衍化关系,为预防口蹄疫流行提供了科学依据。“八五”以来,共承担国家和省部级科研课题和监测项目70余项,是多项国家攻关、攀登计划、“973”和“863”等重大科研项目的主持单位;共获得国家和省、部级科学技术奖励50余次,发表论文2000余篇,获技术专利30余项,开发技术产品40余种。目前,该室在首席科学家谢庆阁研究员领导之下,一批年富力强富有奉献精神的学术骨干正在口蹄疫分子诊断、基因工程疫苗、预警预报信息和权威咨询系统等高技术领域开展研究工作,必将为预防口蹄疫提供更为先进有力的技术手段。
国家口蹄疫参考实验室诊断检疫技术简介
(一)现有诊断检疫技术(试剂盒)本实验室经过多年的研究和实践,建立了病毒分离、补体结合试验(CFT)病毒中和试验(VNT)、血清中和试验等诊断方法,并形成了一套完善的诊断程序,符合国际通用的操作标准。同时发展了O型口蹄疫正向间接血凝诊断法,口蹄疫和猪水泡病反向间接血凝诊断法,琼脂扩散试验,以及口蹄疫VIA诊断和RT-PCR诊断试剂盒,满足口蹄疫样品的诊断和定型。近年来,本实验室根据科学技术发展,结合国际组织推荐的口蹄疫诊断检疫技术,研制出了多种试剂盒和检测方法。1、O型口蹄疫液相阻断ELISA诊断试剂盒液相阻断ELISA是国际兽疫局(OIE)推荐的检测口蹄疫病毒抗体的标准方法。用分离于我国的口蹄疫O型毒株研制出液相阻断ELISA试剂盒,用于测定牛、猪、羊血清中针对O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体。本试剂盒主要用途,一是对进出口动物口蹄疫病毒抗体监测;二是监测口蹄疫疫苗免疫抗体,以评价动物群体抗感染能力。
2、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒(3ABC-I-ELISA)
区分口蹄疫感染和免疫动物是国际活畜进出口贸易的必检项目,也是OIE判定疫情国家和非疫情国家的依据。本试剂盒适用于活畜进出口调运、疫区净化检疫和群体无症状感染评价,检测活畜血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体,以区分感染和免疫动物。本试剂盒可测出牛感染后长达480天(16个月)的感染抗体,其多项技术指标已超过国外同类产品。
3、口蹄疫多重RT-PCR诊断试剂盒(FMD Multi RT-PCR)本试剂盒适用于病料诊断、反刍活畜和肉品等畜产品染毒检测,特异性扩增病料、O/P液和肉品中的口蹄疫病毒基因片段,确认样品供体是否染毒。本试剂盒含有三对引物,可扩增多个口蹄疫病毒基因片段,至少适用于口蹄疫O型、A型和AsiaⅠ型的三个血清型的检测,可查出0.07LD50的病毒量。4、口蹄疫原位杂交检测法原位杂交是借助核酸分子杂交的方法,在显微镜水平检测和定位特异的核酸片段。本试剂盒设计的敏感性加强型原位杂交方法,定位急性期和持续感染组织中的口蹄疫病毒,适用于检测牛、羊、猪和乳鼠等动物组织石蜡切片、冰冻切片以及细胞爬片。5、口蹄疫病毒蛋白原位检测法
本试剂盒属于组织化学(immunohistochemistry)方法,是利用抗原与抗体间特异性结合和标记技术,对组织和细胞内的特定抗原或抗体进行定位、定性、或定量检测的技术。用于检测检测牛、羊、猪和乳鼠等动物组织石蜡切片、冰冻切片以及细胞爬片中感染的口蹄疫病毒。(二)正在研制的诊断检疫试剂盒
1、口蹄疫ELISA诊断定型试剂盒;2、口蹄疫诊断金标试纸条;3、口蹄疫RT-PCR-ELISA试剂盒;4、口蹄疫实时PCR(real-time PCR)诊断技术;注:进行口蹄疫病原诊断鉴定的任何样品必须维持pH7.6-7.8的环境。
主要技术工作内容
1、基础研究以分子生物学技术和生物信息技术为主,结合常规技术,开展口蹄疫病毒基因组结构与功能、遗传变异、生态学与流行病学、病毒与宿主的相互作用即感染、传染、致病和免疫机理等基础性研究,揭示口蹄疫发生、发展、演变及流行成灾规律,实现原始创新与自主知识产权获得,为口蹄疫防防制及生物制品开发提供新理论和新思路。2、应用基础研究与防制产品开发以基础研究成果和发现为线索,利用动物、植物和微生物类生物反应器组装技术平台,研究开发新型疫苗、诊断制剂、免疫佐剂、免疫增强剂、消毒剂等防治产品。3、诊断与监测 推行和建立国际标准化诊断检疫技术,发展新的病原分子检测方法。实现口蹄疫诊断检疫和实时监测及免疫状况评价体系,监视国外口蹄疫疫情,及时上报疫情动态及监测结果,提出预警方案和防制措施建议。4、技术服务、咨询与培训 诊断检测多种送检样品,提供防疫技术咨询及技术培训。根据送检样品和要求,能检测样品中的口蹄疫病毒、抗原、结构蛋白抗体或非结构蛋白抗体,实现病毒分离和定型、免疫抗体检测和动物免疫状况评价、动物个体感染和免疫鉴别以及群体感染状况评价,分析病毒抗原和遗传关系,提出疫苗对口选择建议。支持不同形式的技术培训,包括集中授课培训、现场技术应用培训和实验室技术工作指导。提供多种诊断试剂(盒)。5、资源平台建设 建立及维护标准毒种库(全部血清型)、疫苗毒种库、血清抗体库、序列数据库。
首席科学家:谢庆阁专 家 组:谢庆阁、才学鹏、张永光、殷 宏、柳纪省、刘湘涛、刘在新日常工作管理:刘湘涛、刘在新实验室专家:谢庆阁、张永光、刘湘涛、刘在新、马军武、王永录、常慧芸、韩雪清、陈应理、张 强、包慧芳、陈 涓、李 冬、刘力宽实验室功能区设置:研 究 区 域:基因工程室、蛋白工程室、细胞工程室、免疫室公共技术资源:生物信息室、公共技术室、毒种资源室、毒区实验室
对外诊断检测:口蹄疫诊断检测中心
日常工作联系电话:刘湘涛 0931-8342710(办)13609313937(移动)刘在新 0931-8342585(办)13893603044(移动)