钙黄绿素,AM：细胞活力和膜完整性的双重检测
钙黄绿素 AM 是一种能渗透细胞的染料，可用于测定大多数真核细胞的活力。 在活细胞中，细胞内的酯酶水解乙酰氧甲酯之后，非荧光的钙黄绿素 AM 转化为绿色荧光钙黄绿素。
艾美捷超级纯钙黄绿素,AM：
货号：AAT-22003
等级：超纯
分子量：994.86
溶剂：DMSO（二甲基亚砜）
消光系数（cm -1 M -1）：81000
激发（纳米）：501
发射（纳米）：521
H-短语：H303, H313, H333
危险符号：XN
预期用途：仅限研究使用（RUO）
R-短语：R20, R21, R22
储存：冷冻（< -15 °C）；尽量减少光照暴露
激发：488 纳米激光
发射：530, 30 纳米滤光片
仪器规格(S)：FITC通道
激发：490
发射：525
截止：515
推荐板：黑色壁，透明底
仪器规格(S)：底部读取模式
激发和发射
Calcein-AM是一种非荧光化合物，分子量为994.86道尔顿。它被非特异性的细胞内酯酶水解成calcein。Calcein是一种荧光化合物，激发峰值为501纳米，发射峰值为521纳米。在流式细胞仪中，可以用488纳米激光激发并在FITC通道读取。在荧光板读数器中，可以使用Ex/Em = 490/525纳米的设置，并在515纳米处设置截止滤光片。
毒性
Calcein AM的安全数据表指出，它是一种非危险化学品或混合物。在生命科学和药物发现研究中，由于其相对较低的细胞毒性，calcein AM通常用于研究酶活性、细胞活力、膜完整性和长期细胞追踪。然而，对于特定的细胞系和实验条件，高浓度的calcein AM显示出对细胞的毒性。
Calcein AM能否固定？
简单地说，不，calcein AM是不可固定的。无论使用何种固定方法——醛类或甲醇固定——用calcein AM染色的细胞都会失去它们的染色模式。此外，calcein AM不能用于固定细胞，因为它们缺乏将calcein AM转化为calcein所需的酯酶和保留染料所需的膜完整性。Calcein AM是一种荧光原酯酶底物，只能用于活细胞以确定细胞活力。
Calcein AM能染色细菌吗？
Calcein AM染色不仅适用于真核样本，还可用于确定细菌样本的细胞活力。Calcein AM适用于检测许多活的革兰氏阴性细菌菌株，可用于微生物学研究、环境监测、药品无菌性测试和食品及植物评估技术。与真核细胞一样，细菌在其细胞质中含有微生物酯酶，可以裂解calcein AM的疏水阻断基团，并将它们转化为荧光的calcein。信号可以使用荧光仪器测量，其强度与存在的活细菌数量成正比。
如何配制calcein溶液？
Calcein及其衍生物calcein AM通常作为冻干固体供应，必须在加载到细胞之前在溶液中重悬，通常是DMSO。要配制calcein或calcein AM的库存溶液，请在高质量的无水DMSO中重悬染料，使浓度大约为1毫克/毫升。例如，向50微克的calcein AM中加入50微升的DMSO将得到1毫克/毫升的库存溶液。
对于calcein AM，需要将库存溶液进一步稀释到水性缓冲液中（例如，HBSS），然后才能加载到细胞中。作为水性溶液，calcein AM容易水解，应在一天内使用。
什么是calcein AM的阳性和阴性对照？
阳性对照：这是一群在正常培养环境中生长的健康、未经处理的细胞。健康、未经处理的细胞含有水解calcein AM成荧光产物的细胞内酯酶和保留染料的完整质膜。用calcein AM染色阳性对照将导致细胞在蓝光激发下发出绿色荧光。
阴性对照：这是一群死亡细胞，通常用乙醇或甲醛固定。死亡细胞不含有细胞内酯酶，因此无法将非荧光的calcein AM底物转化为荧光的calcein产物。用calcein AM染色的阴性对照不会产生荧光信号。
在进行calcein AM细胞活力测定时，执行目标样本时，拥有适当的阳性和阴性对照非常重要，以便跟踪报告结果的变化和相似性。所有对照应来自与目标样本相同的培养。
Calcein AM能染色死亡或坏死的细胞吗？
不，calcein AM不染色死亡或坏死的细胞，因为它们缺乏将非荧光的calcein AM转化为荧光calcein所需的酶（例如，非特异性细胞内酯酶）。
Calcein AM染色协议
简要总结
准备库存溶液（2至5毫摩尔）
准备工作溶液（1至10微摩尔）
准备细胞成像
去除细胞培养基并洗涤细胞
将工作溶液加入培养中
在37°C下孵化（30至60分钟）
替换工作溶液以去除多余的探针
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脂肪变性比色分析试剂盒典型染色示例分析
脂肪肝，也称为脂肪性肝病，是一种以细胞内脂质异常积累为特征的病理过程。虽然单纯的脂肪肝可能与肝功能的显著损害无关，但过多的脂肪积累可能导致肝硬化甚至肝衰竭。非酒精性脂肪肝的分子机制尚不清楚，关于脂质积累后导致肝细胞损伤进展的途径（s）的信息也很少。确定肝毒性是药物发现过程中的一个重要组成部分，其中包括脂肪肝作为评估的关键参数之一。Cayman的脂肪肝比色测定试剂盒提供了一个方便的工具，用于评估药物候选物的脂肪肝风险。在这个测定中，使用油红O染色肝细胞中的中性脂质。然后，在染料从脂滴中提取后，使用板读数器对脂质积累进行定量。试剂盒中包含氯喹作为阳性对照。
需要但未提供的：请下载试剂盒手册，以验证是否需要超纯水（Milli-Q或等效物）或该测定的其他任何组分。
警告：本品不适用于人类或兽医用途。
艾美捷Cayman的脂肪变性比色分析试剂盒（#10012643-1），用于评估使用油红O染色肝细胞中性脂质的候选药物的乳糖病风险。从脂滴中提取液后，可以使用平板读数器定量脂质积聚。试剂盒中包含氯喹作为阳性对照，用于筛选诱导肝细胞脂肪变性的候选药物。
脂肪变性比色分析试剂盒测定方案：
板配置
在板孔的使用上没有特定的模式。可以使用12孔、24孔或96孔板。一个典型的实验板将包括没有细胞的孔和用实验化合物或载体处理的细胞孔。我们建议每个处理进行三次重复。我们建议您在提供的模板表上记录每个孔的内容。
细胞处理：
以下方案是为96孔板设计的。对于其他板型，应相应调整每个孔施加的培养基/溶液体积。
1. 在96孔板中每孔播种10⁴个细胞。培养细胞过夜。
2. 第二天，用实验化合物或载体处理细胞72小时，或根据您的典型实验方案使用的时间。氯喹，一种已知能诱导脂肪肝的化合物，作为试剂盒中的阳性对照。推荐的浓度是25μM。在这个浓度下，经过72小时的处理后，应该可以观察到脂滴积累的显著诱导。
3. 结束实验，并使用下面描述的脂滴染色程序检查实验化合物对脂肪肝的影响。
细胞内脂滴的分布
下图展示了使用本试剂盒在肝细胞中观察到的脂质积累的典型染色示例。您的结果可能会根据所接种的细胞数量和脂质积累的程度而有所不同。
图：氯喹对HepG2细胞脂滴积累的影响。HepG2细胞以每孔10⁴个细胞的密度在96孔板中接种，并在37°C孵化器中过夜培养。第二天，细胞用载体或不同剂量的氯喹处理三天。A组：用载体处理的HepG2细胞。细胞中有一些脂滴，表现为红色点状。B组：用25μM氯喹处理的HepG2细胞显示出脂滴的显著积累，这通过油红O染色观察到的大量红色点状明显可见。
脂肪变性比色分析试剂盒文献参考：
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2.Donohue,T.M,r.Alcohol-induced steatosisin liver cells.World JGastroenterol.13(37),4974-4978(2007).
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丙氨酸转氨酶活性分析试剂盒：用于研究和临床的高效检测工具
Cayman的丙氨酸转氨酶（ALT）比色活性测定试剂盒提供了一种检测血清、血浆、组织样本和细胞裂解物中ALT活性的便捷方法。ALT活性的测量是通过监测使用乳酸脱氢酶（LDH）的偶联反应系统中NADH氧化的速率来进行的。NADH氧化为NAD+的同时，340nm处的吸光度降低。在ALT活性是限速的情况下，速率下降与样本中的ALT活性成正比。
需要但未提供：请下载试剂盒小册子，以验证此检测是否需要超纯水（Milli-Q或同等产品）或任何其他成分。
警告：本品不适用于人类或兽医。
测定方案：
艾美捷Cayman的丙氨酸转氨酶活性分析试剂盒（#700260-96），提供了一种方便的方法，用于检测血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中的ALT活性。通过监测乳酸脱氢酶（LDH）耦联反应系统中NADH氧化的速率来测量ALT活性。NADH氧化成NAD*伴随着在340纳米处吸光度的降低。在ALT活性成为速率限制步骤的情况下，速率的降低与样本中的ALT活性直接成比例。
执行测定：
1. 阳性对照孔 - 在板中指定的孔中加入150μl的底物、20μl的辅因子和20μl的阳性对照。
2. 样本孔 - 在板中指定的孔中加入150μl的底物、20μl的辅因子和20μl的样本。
3. 覆盖板并在37℃下孵化15分钟。
4. 移除板盖，并迅速通过向所有使用的孔中加入20μl的ALT启动剂来启动反应。
5. 立即在37℃下每分钟测量一次340纳米处的吸光度，持续10分钟。如果ALT活性较低，继续读取长达60分钟。注意：背景孔（可选）- 在评估样本中的ALT活性时，背景活性通常不重要。然而，如果需要，可以为每个样本获得背景值。对于每个正在测定的样本，在板中指定的孔中加入150μl稀释的测定缓冲液（不含ALT底物）、20μl的样本、20μl的ALT辅因子和20μl的ALT启动剂。立即在37℃下每分钟测量一次340纳米处的吸光度，持续10分钟。如果ALT活性较低，继续读取长达60分钟。
图. 猪心丙氨酸转氨酶的活性
丙氨酸转氨酶活性分析试剂盒文献参考：
1.shiguro,M,Takio,K,Suzuki,M.,et al.Complete amino acidsequence of human liver cytosolic alanine aminotransferase(GPT)determined by a combination of conventional and mass spectral methods.Biochemistry 30,10451-10457(1991).
2.Yang,R.-Z.,Park,S,Reagan,WJ.,et al.Alanineaminotransferase isoenzymes:Molecularcloning and quantitative analysis of tissue expression in rats andserum elevation in liver toxicity.Hepatology 49,598-607(2009).
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4.Pratt,D.S.and Kaplan,M.M.Evaluation of abnormal liver-enzyme results inasymptomatic patients.N.Engl.J.Med.342(17),1266-1271(2000).
5.Kim,H.C,Nam,C.M,Jee,S.H,et al.Normal serum aminotransferaseconcentration and risk of mortality from liver diseases:Prospective cohortstudy.BMJ(2004).
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碱性磷酸酶比色活性检测试剂盒：血清、血浆和组织样本的快速比色分析
Cayman的碱性磷酸酶（ALP）比色活性测定试剂盒提供了一种方便的方法，用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中测量ALP活性，检测限为0.5 U/L。ALP活性的测量是通过监测色原性底物对硝基苯磷酸酯（pNPP）的脱磷酸作用来完成的。在第一步中，ALP使pNPP脱磷酸生成对硝基苯酚。在第二步中，酚羟基在碱性条件下被脱质子，生成对硝基苯酚盐，产生强烈的黄色，可以使用405纳米处的吸光度来测量。在ALP活性成为速率限制步骤的情况下，405纳米处吸光度的增加与样本中的ALP活性直接成比例。
需要但未提供的：请下载试剂盒手册，以验证是否需要超纯水（Milli-Q或等效物）或该测定的其他任何组分。
警告：本品不适用于人类或兽医用途。
测定方案：
艾美捷Cayman的碱性磷酸酶比色活性检测试剂盒（#701710-480），用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中测量ALP活性，检测限为0.5 U/L。ALP活性的测量是通过监测色原性底物对硝基苯磷酸酯（pNPP）的脱磷酸作用来完成的。在第一步中，ALP使pNPP脱磷酸生成对硝基苯酚。在第二步中，酚羟基在碱性条件下被脱质子，生成对硝基苯酚盐，产生强烈的黄色，可以使用405纳米处的吸光度来测量。在ALP活性成为速率限制步骤的情况下，405纳米处吸光度的增加与样本中的ALP活性直接成比例。
预实验准备：
试剂准备
1. ALP测定缓冲液
此瓶含有30毫升的ALP测定缓冲液（项目编号400083），可直接使用。
2. ALP底物
此瓶含有作为ALP底物的pNPP片剂（项目编号400112）。将两片片剂溶解在2.7毫升ALP测定缓冲液中。这是足够测定一个96孔板的底物体积。注意：为了防止污染片剂，避免用手直接接触片剂。保护ALP底物溶液免受光线照射。它在室温下稳定四小时。
3. ALP阳性对照
此瓶含有10微升的牛ALP作为阳性对照。将4微升的ALP阳性对照（项目编号400113）与396微升的ALP测定缓冲液混合，得到ALP阳性对照（100X）库存溶液。进一步将ALP阳性对照（100X）库存溶液稀释，将4微升的ALP阳性对照（100X）与396微升的ALP测定缓冲液混合，得到ALP阳性对照（1X）工作溶液。ALP阳性对照（1X）工作溶液在室温下稳定四小时。两种稀释的ALP阳性对照酶库存在4℃下至少稳定72小时。
4. ALP停止溶液
此瓶含有2M氢氧化钠（NaOH）溶液。将2.5毫升的ALP停止溶液（项目编号400114）与7.5毫升的纯水混合，最终浓度为500mM。稀释的ALP停止溶液在室温下至少稳定一个月。
添加和恢复
测定缓冲液、小鼠肝组织提取物和人血清被添加了ALP，并使用ALP比色活性测定试剂盒进行分析。通过与在缓冲液中测量的相同添加物的活性比较，计算了血浆和组织提取物中ALP的百分比恢复。结果如下。误差条代表ALP活性多次测量之间的标准偏差。
图. 小鼠肝组织提取物和人血清中的添加和恢复。
碱性磷酸酶比色活性检测试剂盒文献参考：
1.Sharma,U.,Pal,D,and Prasad,R.Alkalinephosphatase:Anoverview.Ind.JClin.Biochem.29(3),269-279(2014).
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AST活性分析工具：天冬氨酸转氨酶比色活性测定试剂盒
Cayman的天冬氨酸氨基转移酶（AST）比色活性测定试剂盒提供了一种方便的方法，用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中检测AST活性。通过监测与苹果酸脱氢酶（MDH）耦联的反应系统中NADH氧化的速率来测量AST活性。NADH氧化成NAD+伴随着在340纳米处吸光度的降低。在AST活性速率成为限制性条件的情况下，吸光度降低的速率与样本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脱氢酶（LDH）以防止血清中通常存在的内源性丙酮酸的干扰。
需要但未提供的：请下载试剂盒手册，以验证是否需要超纯水（Milli-Q或等效物）或该测定的其他任何组分。
警告：本品不适用于人类或兽医用途。
测定方案：
艾美捷Cayman的天冬氨酸转氨酶比色活性测定试剂盒（#701640-96），用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中检测AST活性。通过监测与苹果酸脱氢酶（MDH）耦联的反应系统中NADH氧化的速率来测量AST活性。NADH氧化成NAD⁺伴随着在340纳米处吸光度的降低。在AST活性速率成为限制性条件的情况下，吸光度降低的速率与样本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脱氢酶（LDH）以防止血清中通常存在的内源性丙酮酸的干扰。
样本准备：
血浆
通常，正常人血浆中的AST浓度范围为8-40 U/L。
1. 使用肝素或柠檬酸等抗凝剂采集血液。
2. 在4℃下，以700-1000g的速度离心血液10分钟。用移液管取上层黄色血浆层，不要扰动白色纤维层。将血浆存放在冰上。如果不在同一天进行测定，存放在-80℃。避免反复冻融。
3. 血浆在测定前不需要稀释。
血清
通常，正常人血清中的AST浓度范围为8-40 U/L。
1. 采集血液时不使用肝素或柠檬酸等抗凝剂。
2. 让血液在25℃下凝固30分钟。
3. 在4℃下，以2000g的速度离心血液15分钟。用移液管取上层黄色血清层，不要扰动白色纤维层。将血清存放在冰上。如果不在同一天进行测定，存放在-80℃。避免反复冻融。
4. 血清在测定前不需要稀释。
组织匀浆
1. 在解剖前，用pH 7.4的PBS溶液冲洗组织，以去除任何红细胞和凝块。
2. 每克组织用5-10毫升冷缓冲液（例如，100 mM Tris，pH 7.8）匀浆。
3. 在4℃下，以10000g的速度离心10分钟。
4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天进行测定，将样本存放在-20℃。
注意：如果340纳米波长处吸光度降低的速率（A340）大于0.4吸光单位/分钟，需要用测定缓冲液（1X）稀释样本以落在测定的线性范围内。
细胞裂解液
1. 通过离心（例如，在4℃下，以1000-2000g的速度离心10分钟）收集细胞（约5×10^5个）。对于贴壁细胞，使用橡胶警察而不是蛋白水解酶。
2. 在0.5-1.0毫升冷缓冲液（例如，100 mM Tris，pH 7.5，1 mM EDTA）中匀浆细胞沉淀物。
3. 在4℃下，以10000g的速度离心10分钟。
4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天进行测定，将样本冷冻在-80℃。
注意：如果A340降低的速率大于0.4吸光单位/分钟，需要用测定缓冲液（1X）稀释样本以落在测定的线性范围内。
添加和恢复
人血清样本中添加了AST，并使用天门冬氨酸氨基转移酶比色活性测定试剂盒进行分析。结果如下。
图. 人血清中的添加和恢复
天冬氨酸转氨酶比色活性测定试剂盒文献参考：
1.Kirsch,J.F,Eichele,G,Ford,G.C,et al.Mechanism ofaction of aspartateaminotransferase proposed on the basis of its spatial structure.J.Mol.Biol.174(3),497-525(1984).
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3.Okanoue,T,Ebise,H,Kai,T,et al.A simple scoring system using type IVcollagen 7S and aspartate aminotransferase for diagnosing nonalcoholicsteatohepatitis and related fibrosis.J.Gastroenterol.53(1),129-139(2018).
4.Unalp-Arida,A.and Ruhl,C.E.Liver fibrosis scores predict liver diseasemortality in the United States population.Hepatology 66(1),84-95(2018).
5.Xiao,G.,Yang,J,and Yan,L.Comparisonof diagnostic accuracy of aspartateaminotransferase to platelet ratio index and fibrosis-4 index for detectingliver fibrosis in adult patients with chronic hepatitis B virus infection:Asystemic review and meta-analysis.Hepatology 61(1),292-302(2015).
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白蛋白(人)ELISA试剂盒：快速测定；在三小时内得到结果
Cayman的白蛋白（人）ELISA试剂盒是一种竞争性检测方法，可用于定量血浆、血清和尿液中的人白蛋白。该检测使用两种标准：用于血浆和血清测量的血清白蛋白，以及用于尿液测量的从人类尿液中纯化的白蛋白。该测定的范围为7.8-1000ng/ml，血清和尿液中的中点（50%B/B0）分别为90-130ng/ml和50-80ng/ml，血清中的灵敏度（80%B/B0）约为25ng/ml，尿液中的灵敏度约为15ng/ml。
需要但未提供：请下载试剂盒小册子，以验证此检测是否需要超纯水（Milli-Q或同等产品）或任何其他成分。
警告：本品不适用于人类或兽医。
检测原理：
艾美捷Cayman的白蛋白(人)ELISA试剂盒（#501760），基于天然白蛋白与白蛋白-辣根过氧化物酶（HRP）缀合物（白蛋白-HRP追踪器）对限量的白蛋白单克隆抗体的争夺。由于白蛋白-HRP追踪器的浓度保持恒定，而天然白蛋白的浓度变化，能够与白蛋白单克隆抗体结合的白蛋白-HRP追踪器的量将与孔中天然白蛋白的浓度成反比。这种抗体-白蛋白复合物与之前固定在孔中的山羊抗小鼠IgG结合。然后对板进行洗涤以去除任何未结合的试剂，并向孔中加入TMB底物溶液（其中含有HRP的底物）。这一酶促反应的产物具有明显的黄色，并且在450纳米处吸收强烈。通过分光光度法测定的这种颜色的强度与结合在孔中的白蛋白-HRP追踪器的量成正比，这又与孵化期间孔中存在的游离白蛋白的量成反比，如方程式所述：
吸光度[结合白蛋白-HRP追踪器]c1/[白蛋白]Aschematic
过程示意图见图1。
ELISA示意图
计算：
数据准备
以下是在图形分析前推荐的数据准备程序。
注意：如果板读数器没有从其他板的吸光度读数中减去Blk孔的吸光度读数，请确保现在这样做。
1. 平均NSB孔的吸光度读数。
2. 平均B₀孔的吸光度读数。
3. 从B₀平均值中减去NSB平均值。这是校正后的B₀或校正后的最大结合。
4. 计算剩余孔的B/B₀（样本或标准结合/最大结合）。为此，从S1吸光度中减去平均NSB吸光度，并除以校正后的B₀（来自步骤3）。对S2-S8和所有样本孔重复此操作。（要获得逻辑四参数拟合的%B/B₀，将这些值乘以100。）
注意：TA值不用于标准曲线计算。相反，它们被用作诊断工具。TA孔的低吸光度或无吸光度可能表明酶-底物系统存在故障。
特征：
测量人血浆、血清和尿液中的白蛋白
检测24个样本，一式三份，36个样本，共两份
将血清白蛋白水平降至25 ng/ml，尿液白蛋白水平降至15 ng/ml
快速测定；在三小时内得到结果
白蛋白(人)ELISA试剂盒文献参考：
1.Quinlan,G.J.,Martin,G.S.,and Evans,T.W.Albumin:Biochemical propertiesand therapeutic potential.Hepatology 41(6),1211-1219(2005).
2.Speeckaert,M.M.,Speeckaert,R.,Van De Voorde,L.,et al.Immunochemicallyunreactive albumin in urine:Fiction or reality?Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.48(2),87-96(2011).
3.Carvalho,J.R.and Machado,M.V.New insights about albumin and liverdisease.Ann.Hepatol.17(4),547-560(2018).
4.Corti,M.C.,Guralnik,J.M.,Salive,M.E.et al.Serum albumin level andphysical disability as predictorsof mortality in older persons.JAMA 272(13),1036-1042(1994).
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Testosterone ELISA Kits睾酮ELISA试剂盒测定方案及检测原理
睾丸素，C19H28O2，（4-雄甾-17β-醇-3-酮）是一种来自雄激素群的类固醇激素，存在于哺乳动物、爬行动物、鸟类和其他脊椎动物中1,2。
在哺乳动物中，睾丸素主要在男性的睾丸和女性的卵巢中分泌，尽管肾上腺也分泌少量。它是主要的男性性激素和一种合成代谢类固醇。
在男性中，睾丸素在男性生殖组织如睾丸和前列腺的发展中起着关键作用，同时促进次要性征的发展，如增加肌肉、骨骼质量以及体毛的生长3。在没有睾丸素刺激的情况下，精子发生不会超过减数分裂阶段。此外，睾丸素对于健康和幸福4以及预防骨质疏松症5至关重要。平均而言，成年男性人体产生的睾丸素大约是成年女性人体的十倍，但女性对这种激素更敏感6。睾丸素在血糖稳态和脂质代谢中扮演着重要角色。代谢综合征是一系列倾向于2型糖尿病、动脉粥样硬化和心血管发病率及死亡率的风险因素的聚集。综合征的主要组成部分是内脏肥胖、胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受、血压升高和血脂异常（甘油三酯升高、高密度脂蛋白胆固醇水平低），以及促炎症和促血栓状态。横断面流行病学研究报告了血浆睾丸素与胰岛素敏感性之间的直接相关性，低睾丸素水平与2型糖尿病风险增加相关，这在前列腺癌男性的雄激素剥夺治疗中得到了生动的说明。
大多数脊椎动物中都存在睾丸素。鱼类产生一种略有不同的形式，称为11-酮睾丸素7。其在昆虫中的对应物是蜕皮激素8。这些普遍存在的类固醇表明性激素具有古老的进化历史9。
1. Cox, R. M., & John-Adler, H. B. (2005). Testosterone has opposite effects on male growth in lizards (Sceloporus spp.) with opposite patterns of sexual size dimorphism. Journal of Experimental Biology, 208(24), 4679–4687.
2. Reed, W. L., et al. (2006). Physiological effects on demography: a long-term experimental study of testosterone’s effects on fitness. The American Naturalist, 167(5), 667–683.
3. Mooradian, A. D., et al. (1987). Biological actions of androgens. Endocrine reviews, 8(1), 1–28.
4. Bassil, N., et al. (2009). The benefits and risks of testosterone replacement therapy: a review. Therapeutics and clinical risk management, 5, 427–448.
5. Tuck, S. P., & Francis, R. M. (2009). Testosterone, bone and osteoporosis. In T. H. Jones (Ed.). Advances in the management of testosterone deficiency (vol. 37, 123–132). Sheffield, GB: Karger Publishers.
6. Dabbs, M., & Dabbs, J. M. (2000). Heroes, rogues, and lovers: Testosterone and behavior. New York, NY:McGraw-Hill.
7. Nelson, R. J. (2005). An introduction to behavioral endocrinology (3rd ed.). Sunderland, MA: Sinauer Associates.
8. De Loof, A. (2006) Ecdysteroids: The overlooked sex steroids of insects? Males: The black box. Insect Science,13(5), 325–338.
9. Mechoulam, R., et al. (1984). Estrogens in insects. Experientia, 40, 942–944.
检测原理：
艾美捷Testosterone ELISA Kits睾酮ELISA试剂盒（#K032-H1）使用特定生成的抗体来测量尿液和粪便样本中，或在提取的血清和血浆中的睾丸素及其代谢物。该试剂盒不推荐用于未经提取的血清、血浆或唾液样本。试剂盒能够定量测量在重组缓冲液样本和组织培养基样本中存在的睾丸素。请在进行此测定之前阅读完整的试剂盒说明书。提供了睾丸素标准品以生成测定的标准曲线，所有样本均应从标准曲线上读取。标准品或稀释样本被移液到一个涂有捕获兔抗体的清晰微孔板中。向孔中的标准品和样本中添加睾丸素过氧化物酶缀合物。通过向每个孔中添加多克隆抗体来启动结合反应。经过2小时孵化后，对板进行洗涤并添加底物。底物与结合的睾丸素-过氧化物酶缀合物反应。经过短暂的孵化后，反应被终止，生成的颜色强度在能够测量450纳米波长的微孔板读数器中被检测。在对样本稀释进行适当校正后，使用大多数板读数器提供的软件计算样本中睾丸素的浓度。
Testosterone ELISA Kits睾酮ELISA试剂盒组件：
涂覆式透明96孔板
涂有山羊抗兔IgG的透明塑料微孔板。
试剂盒 K032-H1 或 -H5，1或5个，每个产品编号 X016-1EA，1 x 8条孔板
睾丸素标准品
200,000 pg/mL的睾丸素在特殊稳定溶液中。
试剂盒 K032-H1 或 -H5，70 µL 或 350 µL，产品编号 C113-70UL 或 -350UL
DetectX®睾丸素抗体
一种特异于睾丸素的兔多克隆抗体。
试剂盒 K032-H1 或 -H5，3 mL 或 13 mL，产品编号 C111-3ML 或 -13ML
DetectX®睾丸素缀合物 必须储存在 ≤ -20°C。
一种在特殊稳定溶液中的睾丸素-过氧化物酶缀合物。
试剂盒 K032-H1 或 -H5，3 mL 或 13 mL，产品编号 C315-3ML 或 -13ML
测定缓冲液浓缩液
需要用去离子水或蒸馏水稀释的5倍浓缩液。
试剂盒 K032-H1 或 -H5，28 mL 或 55 mL，产品编号 X065-28ML 或 -55ML
洗涤缓冲液浓缩液
需要用去离子水或蒸馏水稀释的20倍浓缩液。
试剂盒 K032-H1 或 -H5，30 mL 或 125 mL，产品编号 X007-30ML 或 -125ML
TMB底物
试剂盒 K032-H1 或 -H5，11 mL 或 55 mL，产品编号 X019-11ML 或 -55ML
停止溶液
1M的盐酸溶液。腐蚀性。
试剂盒 K032-H1 或 -H5，5 mL 或 25 mL，产品编号 X020-5ML 或 -25ML
板封口膜
试剂盒 K032-H1 或 -H5，1或5个，产品编号 X002-1EA
测定方案：
建议所有标准品和样本都进行双重测定，以使最终用户能够准确确定睾丸素浓度。
1. 使用背面的板布局表以帮助正确识别样本和标准品。
2. 确定要使用的孔数，并将未使用的孔放回带有干燥剂的铝箔袋中。密封Ziploc板袋并储存在4˚C。
将标准品或样本沿板条列（A至H）逐滴加入孔中，以最大限度地利用条孔。
3. 向板中的孔中加入50 µL的样本或标准品。
4. 向非特异性结合（NSB）孔中加入75 µL的1X测定缓冲液。
5. 向最大结合（B0或零标准）孔中加入50 µL的1X测定缓冲液。
6. 使用重复移液管向每个孔中加入25 µL的DetectX®睾丸素缀合物。
7. 除了NSB孔外，使用重复移液管向每个孔中加入25 µL的DetectX®睾丸素抗体。
8. 轻轻拍打板的侧面以确保试剂充分混合。用板封口膜覆盖板并在室温下摇动2小时。我们建议摇动速度在700-900转/分钟左右。如果不摇动板，结合的信号将大约低20%。
9. 抽吸板并在干净的吸收毛巾上轻拍以擦干。
10. 使用重复移液管向每个孔中加入100 µL的TMB底物。
11. 在室温下孵育板30分钟，不要摇动。
12. 使用重复移液管向每个孔中加入50 µL的停止溶液。
13. 在能够读取450纳米波长的板读数器中读取每个孔产生的光密度。
14. 使用板读数器内置的4PLC软件功能计算每个样本的睾丸素浓度。
注意：如果您只使用部分条孔板，在测定结束时丢弃已使用的孔，并保留板框架以用于剩余未使用的孔。
典型标准曲线：
始终运行自己的标准曲线来计算结果。请勿使用此数据
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因子P定量/功能检测试剂盒，助力补体药物开发
因子P不像大多数补体蛋白那样在肝细胞中产生，而是由包括单核细胞、巨噬细胞、T细胞和粒细胞在内的几种细胞类型产生。很可能局部刺激下因子P浓度的短暂增加会增强替代途径。例如，中性粒细胞含有因子P的颗粒，这些颗粒在受到刺激时被分泌出来，可以增强血小板-粒细胞聚集物的形成。在血浆中，因子P的浓度大约为4-25 ?g/mL。因子P是一种延长的53 kDa糖蛋白，它在体内以二聚体、三聚体或四聚体（P2、P3和P4）的形式寡聚，以26:54:20（P2:P3:P4）的比例形成头对尾结构。因子P的突变、缺乏、蛋白水平以及蛋白沉积与疾病和紊乱有关。缺乏因子P通常会增加对脑膜炎球菌病和其他传染病的易感性。血清水平的改变与C3肾小球病、狼疮性肾炎、败血症和慢性心力衰竭以及IgA肾病等疾病有关。
因子P是已知的唯一正向调节补体替代途径的因子，它抑制因子H介导的转换酶解离和C3b失活，同时稳定C3和C5转换酶。功能性（FPF）和定量（FPQ）因子P检测可以用来确定替代途径（AP）的下调是否由Properdin缺乏或功能障碍引起——提供比标准AP功能性检测更高的结果分辨率。
因子P在补体调节中的核心作用使其成为研究以及开发针对补体的药物的有趣靶点。
艾美捷因子P(Properdin)功能与定量检测试剂盒，助力补体药物研发！
Quantitative Factor P Assay因子P定量检测试剂盒：
货号：COMPLFPQRUO
应用：定量检测测试样本中人因子P的含量
检测范围：0-200 ng/mL
检测原理：因子P定量检测是一种夹心ELISA，用于定量检测血清或血浆样本中的人因子P。该检测基于96孔板中包被的抗体，这些抗体能够捕获在板中孵化的测试样本中存在的因子P。与抗体结合的因子P通过带有HRP（辣根过氧化物酶）标记的二抗进行检测。随后，HRP催化底物的裂解，引发颜色变化，该颜色变化与测试样本中因子P的浓度相关联。
P因子功能性检测试剂盒的示意图
Functional Factor P Assay因子P功能检测试剂盒：
货号：COMPLFPFRUO
应用：确定测试样本中因子P的功能。功能性是定性地相对于质控品（人血清）来确定的，质控品被设定为具有100%的功能。
检测范围：0-200% activity
检测原理：因子P功能检测是一种酶联免疫吸附测定（ELISA），它结合了功能性补体活性测定的原理和使用特定标记抗体来检测被捕获的补体蛋白。被捕获补体蛋白的数量与样本中因子P的功能性活性成正比。
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