血液

血液是实验室所接收的最重要的标本之一。送检血液标本有助于识别由细菌、真菌引起的菌血症、脓毒血症、心内膜炎及人工瓣膜感染、化脓性血栓性静脉炎、以及其它感染或导管引起的感染（vascular grafts）.因为大量的各种微生物与血源性感染有关，所以用于血培养的培养基应该能广泛支持各种细菌的生长。所幸的是在过去的十多年间，已经发展出许多用作血培养的改进的培养基及技术，产生出了高度可靠的手工血培养基和自动化血液培养系统。

血标本量，采血时机，及采血量

对于成人患者，每次发热时应该分别在两个部位采集血标本以帮助我们区分是病原菌还是污染菌，特别是对于凝固酶阴性的葡萄球菌、棒状杆菌、viridans链球菌、以及布鲁氏菌要考虑其污染的可能性。一般来说，单一采集的血培养标本更可能被污染，而要检出具有代表性的病原体则往往要在两个以上部位采集两份以上的血作培养。在24h内采血部位不得多于4个以上。此限制考虑到一天中每次发热时只采集2个部位的血作2份血培养就可评价2次发热。作再多的血培养都没有必要。根据几份研究资料表明，95%以上的菌血症都是在头2、3份血培养中检测出来的。

采集血标本应该在使用抗生素之前，尽管有些培养基含有消除抗生素影响的物质。理论上说，采血时机应恰好在发热高峰之前；而实际上应该是在发热高峰后立即采血。采血的总量也是影响检出病原体的重要因素之一。在一项研究中，增加血培养的血量从40ml到60ml可提高检出率10%。对于成人，每次穿刺应采血20～30ml，。对于儿童的采血量就要求少一些，因为其每毫升中的细菌要多些。血与肉汤的比例以1:5～1:10更有利于检出细菌，这或许是肉汤稀释了抑菌物质的缘故。大多数商业血培养系统为了最佳检出，都规定了必要的血标本量。对于标本量不足的血培养标本不必拒收，除非使用的是Isolator system。应定时举办讲座，向临床讲解最佳血培养技术。

初步处理

血培养标本的初步处理需要视所用的培养系统而定。送检的血培养瓶应放于室温待处理。对于一些连续监测系统，培养瓶需要用针通气或将附件插在瓶顶用于压力测定，等等。

直接法

我们不推荐血标本直接作Gram染色，因为通常血流中的细菌太少。一旦检测到有细菌生长就应该取培养瓶的肉汤或培养瓶固相琼脂的细菌作Gram染色。Gram染色报告应该详尽描述以便于选择适当的抗生素。例如，排列的Gram阳性球菌应该作出描述，i.e.,成对的，簇状的，或链状的；而Gram阴性杆菌时，有描述为细小或球杆状的。

当怀疑阳性肉汤中为金黄色葡萄球菌时，要直接作一个‘2-h凝固酶试管法实验’，以快速作出鉴定。有各种资料表明，有些商业鉴定板条能够直接用阳性肉汤接种鉴定出Gram阴性菌。

血培养系统

（略）

培养条件

所有的血培养温度都应在35℃。手工血培养系统应该培养7天。只有肉汤的手工需氧培养瓶要在最后一天作传代培养。对于自动化系统，培养5天就足以检出绝大多数细菌。此外，采用这样的培养时间限制，几乎没有发现污染。对于自动化的血培养不必转种作传代培养。当转种阳性瓶时，所选择的需氧培养基要根据Gram染色涂片的镜下结果。如果Gram染色镜下所见细菌形态提示可能为厌氧菌或者只从厌氧血培养瓶中检出细菌，转种时就要选择厌氧培养基及厌氧条件。

特别考虑的问题

厌氧菌

血液检出厌氧菌的机会很少。在过去几年，一些研究表明血液中厌氧菌的感染呈下降趋势。但是并非所有医院都如此。因此，实验室应该回顾自己的数据以决定是否将厌氧菌的血培养作为常规检查项目。手工血培养瓶/系统不宜用于培养厌氧菌。自动化系统的厌氧培养基足以用于厌氧菌的培养，尽管这些仪器设备的功能还不是十分完美。

苛养菌

有些可引起血液感染的细菌用常规的血培养方法不能检出。布鲁氏菌可生长在常规培养基中；然而，虽然这些菌最少可在3天检出，但是还是建议培养保持21天；而且在某些情况下最后还是需要转种作次培养。HACEK菌群（Haemophilus aphrophilis,Actinobacillus actinomycetemcomitans,Cardiobacterium hominis,Eikenella corrodens,and Kingella kingae）与细菌性心内膜炎有关，也可从常规培养基中培养出，但是需要培养至14天，并且最后需要转种培养。当临床病史提示有弗朗西斯菌感染，阳性培养瓶还需要再另外转种一份到BCYE琼脂，而且所有操作都要在3级层流生物安全柜中按安全规定进行。钩端螺旋体不能在常规培养基中检出。在钩端螺旋体感染发病的第一周采集1～２滴血，应该接种在半固体培养基，如Fletcher’s Ellinghausen-McCullough/Johmson-Harris,或者是Polysorbate 80.培养基，应于室温下培养至6周。

在血液中要发现Bartonella henselae（一种巴尔通体）很困难，但是在某些培养系统则可以培养出来。用Isolator system 时应将处理过的血标本接种在营养加强的血琼脂或巧克力琼脂上，35℃，在提高二氧化碳含量及湿润环境下培养至4周。采用Septi-Chek system 时，Bartonella henselae可以生长，但是要培养到40天。采用只有肉汤的血培养系统培养这种病原体时，可将肉汤涂片，用吖啶橙染色可以观察得到菌体。而这种病原体不会使肉汤浑浊，产生的二氧化碳量也不足以能够被仪器设备检测出来。

分支杆菌

在过去几年中，分支杆菌在HIV患者中越来越多地出现感染流行。这些细菌一般不会在血培养中检出。

导管头

导管头的培养是为了确定菌血症的感染源。最常用的方法为半定量法 ，此法是用５cm长的导管远端部分在血琼脂平板上反复涂抹４遍。经培养产生的菌落数要＞15个才有意义，才能认为存在导管引起感染的可能性。

另外，也已有许多其它用于鉴别是否为导管引起感染的技术报道。……。但是，至今还没有一个最佳实验室方法。因为大多数这类感染有严重的临床表现，普通血培养就可以确定哪个患者需要治疗。

无菌体液

脑脊液

脑脊液标本是用于诊断脑膜炎。细菌性脑膜炎又分为急性和慢性。急性脑膜炎，在症状发作的前24h内，通常由化脓性细菌引起。可能引起感染的病原体要根据患者的年龄以及区分是院外感染还是院内感染。典型的细菌感染主要引起慢性脑膜炎，其症状至少持续了4周，病原体包括有结核分支杆菌，梅毒螺旋体，布鲁氏菌，问号钩端螺旋体，以及博氏疏螺旋体。

CSF通常是经腰椎穿刺采集。每份细菌学检验至少需要0.5ml CSF，当然量多一点会更好。标本应该立即送往实验室并尽快处理。如果不能及时送检，标本应置于室温下。

如果采集的CSF多于1.0ml，应该离心至少1500 X g 15分钟。上清液倾入无菌试管中，留取0.5ml的沉淀和液体，充分混匀，涂片镜检和接种平板培养基作培养。另外，成倍多的标本可采用细胞分离制备标本。

在实验室所有的CSF标本都要作Gram染色。其结果，包括微生物及所见细胞成分的描述和计数都要立即报告给申请医生。快速方法可检测标本中的一些细菌的抗原：B群链球菌、肺炎链球菌、一些脑膜炎奈瑟氏菌的血清型、大肠埃希氏菌（K1囊抗原与脑膜炎奈瑟氏菌B型的有交叉反应），标本离心的上清液或原始标本中可检测到流感嗜血杆菌b型的抗原。据一些研究资料表明，这些快速抗原检测的敏感性与Gram染色的差不多。只是对于一些特殊的脑膜炎，其抗原测定会更敏感一些。另外，研究发现这些快速抗原检测结果对于医生对患者的护理和治疗没有多大的影响。主要原因是这些试验要比 Gram染色贵得多，而且更费事。许多实验室都不再开展这些快速实验或严格限制其使用（如，对于CSF中的白细胞>50时）或需要临床与实验室之间作好协商后。

CSF的培养应该考虑到所用的培养基以及培养条件要适合苛养菌的培养检出。用肉汤培养基没有多大意义。

特殊考虑的问题

厌氧菌

厌氧菌几乎不引起脑膜炎；常规不要求作CSF的厌氧菌培养。但是通常脑脓肿，硬膜下积脓及硬膜外脓肿要作厌氧菌。

分支杆菌

除了对来自源于AIDS患者的CSF要作分支杆菌的检测外，对CSF作分支杆菌检测只考虑以下情况：脑脊液[淋巴]细胞增多，CSF葡萄糖值或蛋白质的值异常。因为分支杆菌在CSF中的量少，所以作培养的标本量就要大点（3—5ml为好），CSF标本要离心3000到3600 X g 30分钟，到掉上清液，将沉淀用旋涡振荡器充分混匀，准备涂片用于AFB染色并接种于适当的培养基，包括液体培养基。培养条件：35℃、8%的CO2环境，至少6周。

钩端螺旋体

钩端螺旋体可以从发病前10天的CSF中发现。采集标本应该在抗生素使用之前和病人在发热时采集。要直接检测钩端螺旋体时，CSF标本就要以1500хg离心30分钟并取沉淀涂湿片在暗视野显微镜下观察。钩端螺旋体可在半固体培养基上培养，如Fletcher’s培养基，Ellinghausen-McCullough/Johnson-Harris培养基，或Polysorbate 80培养基培养检出。离心沉淀标本建议接种0.5ml。室温下培养至6周。

其它体液

其中包括心包液、胸水、腹水和滑液。对其用于微生物检验的送检标本最好是液体，而不是拭子。1—5ml的量已足够检出大多数病原体。对于非卧床透析患者的腹膜炎诊断要采集最少50ml标本才有利于检出病原体。体液应直接接种于血培养瓶或者在床旁收集于无菌、厌氧容器中并立即送到实验室。

在实验室，1ml以上的标本应该至少以1500хg离心15分钟。弃掉上清液，留取约0.5ml沉淀，混匀，涂片作Gram染色并接种于培养基中。如果要采用细胞离心作涂片，在此之前大约要留取0.5ml标本作细胞离心。未离心标本也可在实验室直接接种于血培养瓶中，留取少量（0.5—1.0ml）作Gram染色。选择用于培养体液的固体培养基要有利于培养苛养菌。只有在培养非卧床慢性患者的腹透液时才有必要接种液体培养基，其腹透液中的细菌很少只有约1CFU/ml。是否需要其它体液接种于液体培养基应该由各实验室自己决定。培养应该在有CO2的环境中，35℃培养。

特殊考虑的问题

用于检验分支杆菌的体液标本的处理不同于检验其它细菌，离心要求为3000到3600хg，30min。弃掉上清液，沉淀用于涂片作AFB染色并接种于相应的培养基。培养条件：35℃，8% CO2，培养至少6周。

体液标本可以用含有抗凝剂的试管送检。抗凝剂有肝素、枸橼酸盐和EDTA，对有些细菌有抑制作用。所以最好还是不要用这种方式。如果要采用抗凝剂，就必须要向申请检验的医生说明其对结果的局限性。

耳部位标本

实验室收到的耳部位标本一般有两种，即用于诊断耳炎的拭子和用于诊断中耳炎的外耳、中耳液体。这两个部位潜在感染的细菌有所不同。铜绿假单胞菌常常引起外耳炎。也会有其它细菌，但不会有厌氧菌，所以没有必要作厌氧菌培养。来自于呼吸道的菌群，包括肺炎链球菌、流感嗜血杆、卡他莫拉氏菌以及金黄色葡萄球菌和G-杆菌都可能引起中耳炎。选择接种的培养基和培养条件要考虑到有利于检出这些病原体。厌氧菌可以引起中耳感染；是否作厌氧菌的培养要根据临床要求。如果送检有足够的中耳液标本，就要涂片作直接检查。其它的耳部标本一般不作直接检查。

眼部标本

有几种眼部感染的标本可采集用于微生物学检验，包括用拭子或无菌刮勺采取的结膜标本用以诊断结膜炎，用刮勺刮取的角膜标本用以诊断角膜炎，玻璃体液用以诊断眼内炎；化脓性标本用以诊断蜂窝组织炎；由于许多情况下眼睛感染所获取的标本量很少，所以建议作床旁接种和涂片。

涂片直接检查对于快速诊断眼部感染很重要，直接检查包括Gram染色查细菌。有几种方法可以直接检查标本中的沙眼衣原体，。结膜刮取物作Giemsa染色可检查上皮细胞是否有嗜碱性的胞质内包涵体。单克隆抗体的DFA试验为首选，因为比Giemsa染色更敏感和更具特异性。作DFA试验时，采集标本最好使用由商家提供的专门的采集用具，标本要求其中的柱状细胞或化生的磷状细胞至少要有10个。一种EIA（Chlamydiazyme;Abbott Laboratories,Abbott Park,I11.）商品和核酸探针测定（Pace;Gen-Probe Incorporated,San Diego,Calif.）也可用于结膜标本的沙眼衣原体的检测。

不论是床旁接种还是实验室处理，眼部标本常规细菌培养所用的培养基应该包括有能够检出肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和淋病奈瑟氏菌的营养加强的培养基，选择性培养基应放在有CO2的环境中培养。

分离沙眼衣原体需要细胞培养……。

胃肠道标本

大便和一些肛拭子送往实验室主要是用于引起感染性腹泻或食物中毒的病原学诊断。大便标本应该收集在干净容器中，容器带有密闭的盖，而且大便标本不能被尿液、餐钡和卫生纸污染。肛拭子应该插入含有改良Stuart’s培养基的试管中送检。

对于住院已超过3天的患者的大便标本应该拒收作常规培养，这已定为操作标准。研究资料表明这样的标本作常规培养已无价值。发生在住院期间的腹泻不会是由食物引起病原体感染；对于这种情况，建议作艰难梭菌毒素检查。

对于常规大便培养，接种所用培养基要能检测出沙门氏菌、志贺氏菌和弯曲菌属，这是起码要求。其中有鉴别培养基，如麦康凯琼脂，更多的还有HE琼脂、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂，以及培养弯曲菌的培养基，如含10%羊血的弯曲菌琼脂。营养加强的肉汤培养基有助于提高沙门氏菌和志贺氏菌的检出，但是最好的用法是先在GN肉汤培养6—8小时或Selenite F肉汤培养12—18小时以避免正常菌群的过度生长，然后再转种至琼脂培养基。有特殊的营养加强肉汤有利于弯曲菌的培养；但是没有常规使用。培养检验沙门氏菌和志贺氏菌时，培养条件:大气环境、35℃、2d。培养弯曲菌时，培养条件:微需氧、42℃、3d。

特殊考虑的问题

由气单胞菌属、邻单胞菌属、弧菌属引起的胃肠炎在美国的大多数地区患病率都低，而对这些细菌的培养只有在有申请的情况下才作。虽然血琼脂有助于检测溶血的气单胞菌，常规培养肠道病原体的培养基已足以培养检出气单胞菌和邻单胞菌。选择性培养基也可用。弧菌属和小肠结肠炎耶尔森氏菌也可以生长在常规大便培养基上。但是，最好是用TCBS选择性培养基培养弧菌，用CIN琼脂培养小肠结肠炎耶尔森氏菌。

肠出血性大肠埃希氏菌

与小肠结肠炎有关的肠出血性大肠埃希氏菌在美国各地流行。有些地区发病率很低，实验室只有在有申请时才作培养。然而，1993年，国会和流行病学专家们建议对带血的大便标本常规培养要作肠出血性大肠埃希氏菌的培养。为了检测肠出血性大肠埃希氏菌，要将大便接种于山梨醇-麦康凯琼脂上，用以鉴别分离肠出血性大肠埃希氏菌，该菌不发酵山梨醇以此区别其它几乎所有大肠埃希氏菌。

艰难羧状芽胞杆菌

与艰难羧状芽胞杆菌有关的疾病有假膜性结肠炎和抗生素性腹泻，均由该菌产生的毒素引起，对此通过检测大便中的毒素作出诊断。检测细胞毒素的参考方法是细胞培养法。测定外毒素时，大便标本要离心2000хg，20min或10000хg 10min并用0.45μm滤孔的滤膜过滤。将过滤液经过一系列稀释，接种于人二倍体肺成纤维细胞单层上。另外，可以有许多EIA试剂商品用以检测大便标本中的毒素。EIA法不及细胞培养法敏感，但是它可以在短短几小时内出报告。还可用胶乳凝集实验，用以检测菌体产生的谷氨酸脱氢酶；但是此酶也非艰难羧状芽胞杆菌所特有，与其它菌属有交叉反应。

在进行流行病学调查时，大便标本和肛拭子应该放入厌氧运送系统中有利于厌氧培养分离艰难羧状芽胞杆菌。标本应接种于选择性培养基，如CCFA琼脂，并在厌氧环境培养48h。鉴定为艰难羧状芽胞杆菌后必须检测是否产毒素，以确定其与疾病是否有关联。

金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌

从采集短期潜伏性食物中毒患者的大便或胃内容物检验时,应考虑到由金葡和腊样芽胞杆菌，其标本应作Gram染色；而且由于这两种菌平常都可存在于食物当中，所以必须作定量培养，用明胶缓冲稀释液将标本经一系列稀释后（10-1到10-5），将未稀释和每一步稀释的标本取0.1ml涂抹接种于含有多粘菌素E和奈啶酸或苯甲基乙醇phenylethyl alcohol的血琼脂。如果每克标本含有10 5CFU以上的金葡或腊样芽胞杆菌则具有潜在意义。

肉毒梭菌

食物性肉毒中毒和幼儿肉毒中毒的临床诊断可以通过检测粪便中的肉毒毒素、肉毒杆菌、或两样都检测来确诊。最理想的是，有25到50ml的大便标本、15到20ml的血清、以及采集可疑的食物标本。大多数检验科都没有适当地装备用以处理疑有肉毒中毒的临床标本。在美国一旦怀疑有肉毒中毒，就要立即通知CDC的调查人员以确保适当的诊断、治疗、以及对潜在爆发流行的可能性的调查。

分支杆菌

关于分支杆菌培养，送检大便标本通常是为了培养分离鸟分支杆菌的复合感染（最初感染为AIDS）。处理这种标本（1到2克成型便或5ml稀便）包括有去污染、离心、准备涂片、以及接种适当的培养基。送检胃抽吸物以检验吞咽的痰、偶尔会有胃抽吸物送检作培养，用于检验婴幼儿、儿童以及患有梗阻的病人吞咽的痰。采集这类标本要在早上进餐以前而且标本容器中要有碳酸钠以中和PH。

生殖道标本

生殖道标本送检以确定临床并发症的病因，包括女性的外阴道炎、细菌性阴道炎、生殖器溃疡、尿道炎、子宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎、和卵巢脓肿以及男性的尿道炎、附睾炎、前列腺炎、生殖器溃疡。许多生殖道标本都被生殖道或皮肤表面的正常微生物污染；因此，微生物工作人员必须要能够鉴别正常微生物与潜在的病原体。有些病原体，如淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原体、杜克雷嗜血杆菌是常见致病菌。而其它细菌如肠杆菌、金葡菌、及B群链球菌只有在某些临床表现时才视为致病菌。

任何抽吸物都要作Game染色直接镜检，其它生殖道标本作Gram染色只有少数情况下有帮助。例如，在男性的尿道分泌物的多核粒细胞中发现有G-双球菌就是对淋病有效的初步诊断。在Gram染色的阴道标本涂片中发现有乳酸杆菌与加德纳氏菌比例降低、类杆菌及细弯的Gram染色不定杆菌都有助于阴道炎的诊断。

阴道分泌物的湿片封固是快速简单确认细菌性阴道炎及外阴阴道炎的病因的方法。最好是在采集标本1到2小时内作湿片封固并检查。如果怀疑有毛滴虫，应该立即检查，因为滴虫会很快失去动力。作湿封片是将分泌物与盐水混合，取一部分涂于载玻片上，盖上盖玻片在低倍和高倍镜下镜检，找到‘线索细胞’即符合阴道炎的诊断；发现假菌丝即提示为念珠菌阴道炎；发现活动的滴虫即诊断为滴虫性阴道炎。另外有两项可与湿封片镜检结合进行的诊断实验是测定阴道PH和whiff试验。无感染和只有外阴道炎的妇女的阴道PH通常≤4.5，而患有细菌性或滴虫性阴道炎的阴道PH会≥4.5。Whiff试验阳性的（一旦将10%的KOH加入标本中就会产生刺鼻的鱼腥味）基本上可诊断为细菌性阴道炎，偶尔也会是滴虫性阴道炎。

根据临床要求直接暗视野下镜检或用DFA（CDC认可的试剂）检测组织和组织渗出物中的梅毒螺旋体。用暗视野时，应该在采集到标本20min内进行检查以保持其活力。此检测需要配备暗视野显微镜以及经过良好训练、经验丰富的人员，可根据菌体的疏密程度和规律性、以及其螺旋状运动的特点来识别梅毒螺旋体。另一方面，采用DFA法检测凉干的标本，包括组织、体液、分泌物、伤口渗出物，对于梅毒螺旋体检验其结果更具特异性。

EIA和DFA试验用于检测生殖器标本中的沙眼衣原体的试剂都可买得到。如果使用这些试剂盒，应该按说明书进行操作以及按其建议使用专门器具产品来采集标本。

核酸探针扩增技术已商品化用于检测子宫内标本和尿道标本的沙眼衣原体和淋病奈瑟氏菌，最近有一种组合探针测定法，Affirm VPIII型微生物鉴定试验（Becton Dickinson）,已经被采用于检测阴道分泌物中的假丝酵母菌属、阴道加德纳氏菌和阴道滴虫。使用免疫测定法，采集标本必须使用专门的产品，采集标本的用具用试剂厂商所推荐的。

选择理想的培养基和培养条件，要根据标本来源和感染部位潜在有可能致病的病原体来决定。组织和抽吸物应该接种于有利于苛养菌生长的培养基平板。来源于宫颈、阴道和尿道的标本在作培养和直接检测时，起码要考虑到淋病奈瑟氏菌和沙眼衣原体。培养是目前医学法定的唯一可以认可的诊断方法。最好的分离淋病奈瑟氏菌的途径就是接种选择性琼脂培养基，例如改良的TM培养基，床旁接种，在CO2环境下运送到实验室。或者可用拭子标本来代替（不能用棉拭子，因其可能有毒素损害菌体），拭子标本插入含有运送培养基的运送管在24小时内送到实验室。如果不能及时送到，拭子标本应该置于室温下，决不可冷藏。检验沙眼衣原体时，标本应该放入与前面相同的液体运送培养基中。要立即送检，在实验室采用shell vial 技术接种于细胞。

特殊考虑的问题

B群链球菌

对于产科阴道和会阴部标本分离培养和鉴定B群链球菌有十分重要的意义，因为这种菌可引起严重的脓毒血症和/或新生儿脑膜炎。美国CDC提出了最佳培养B群链球菌的方法步骤，应该予以遵守；采集阴道入口和直肠肛门拭子标本并接种于营养加强肉汤培养基中，例如LIM肉汤或可比较培养基（refer to chapter 17）。经35℃过夜培养后转种于血琼脂平板培养。

杜克雷氏嗜血杆菌

如果怀疑感染杜克雷氏嗜血杆菌，就要在溃疡基底部采集标本并置于室温待处理。用一份拭子作Gram染色。一旦发现有许多多形性的细小的Gram阴性杆菌和球杆菌，呈链状和团状排列，则提示有杜克雷氏嗜血杆菌。有必要使用营养丰富的培养基作培养，例如添加有IsoVitaleX(Becton Dickinson Microbiology System)的巧克力琼脂，以确定诊断。

放线菌属

放线菌属可以引起使用宫内避孕器的妇女患上盆腔炎，IUD送检作培养时应放在无菌液体培养基中并旋涡搅拌，此液体用于接种培养基。培养放线菌属应该在大气环境下培养14天。

下呼吸道标本

送检的下呼吸道标本主要是用于确定肺炎病因。最普通送检到实验室的呼吸道标本是痰，包括咳出的和诱导出的。此范畴的其它种类的标本有气管吸出物，transtracheal吸出物，支气管刷取物，支气管灌洗液和支气管肺泡灌洗液。

下呼吸道标本应该立即送往实验室；如果不能及时送检或及时处理，标本应该冷藏起来。通常情况下，咳出的痰和气管吸出物在处理之前都要在显微镜下筛选过，以确定是下呼吸道的分泌物还是唾液。此步骤是取标本的脓性部分，作一张Gram染色涂片在低倍镜下确定鳞状上皮细胞和/或中性粒细胞的数目，可以评估标本的质量。有一种简单的筛选方法只包括了对鳞状上皮细胞的评估：每低倍视野中的鳞状上皮细胞＞10时，表明该标本被唾液污染，因此不能用于作培养。这个标准实际上对中性粒细胞减少患者很有用，因为对其标本的审查不要求有中性粒细胞。对于用咳痰检验肺炎支原体、军团菌和分支杆菌时不一定要作筛选。

对于所有合格的下呼吸道标本都应该涂片作Gram染色，在油镜下观察有关的细菌的数目。任何细胞内的细菌都应报告。对于要作培养的，建议选择性培养基和非选择性培养基都用。此外还要接种一种用于分离嗜血杆菌的培养基。培养条件:35℃，含有5%CO2的环境。

特殊考虑的问题

支气管肺泡灌洗液和支气管刷检标本

对于支气管肺泡灌洗液和支气管刷检标本，怀疑为呼吸器相关性肺炎时，应考虑作定量培养以便对分离出的微生物的临床意义作出最佳评估。支气管刷检物，含有大约0.01到0.001ml的分泌物，将其采集后立即放入1ml的无菌盐水或肉汤中，并且立即送到实验室。在实验室用旋涡振荡器将其混匀；细胞离心，涂片作Gram染色直接镜检评估，用无菌微量吸管或标定接种环取0.01ml标本接种于适当的平板培养基。菌落计数大于1000/ml肉汤或盐水（相当于106 CFU/ml原始标本）表明与感染有关。在支气管肺泡灌洗时可以采集到10到100ml液体。取一部分标本送往实验室，作细胞离心涂片及Gram染色。染色报告应当包括描述细胞内是否有细菌。有几项研究表明，在＞7%的细胞内见到含有细菌就认为与呼吸器相关性肺炎有关联。将0.001ml X n倍的标本接种于琼脂培养基上，如果某一特殊细菌菌落计数大于10000/ml标本液体，则认为与肺炎相关。

军团菌属

军团菌引起社区性肺炎和医院获得性肺炎并非罕见.军团菌可以通过培养诊断、通过检测尿液中的抗原或血清学试验进行检测。一般来说培养比较受欢迎，培养可以检测军团菌属的所有种，不象其它的方法受到菌种或血清型的限制。在培养之前，标本应该在肉汤培养基中稀释10倍，例如用‘胰蛋白大豆胨’肉汤或无菌水稀释标本中的抑制性物质。因为军团菌生长缓慢，要从高污染的标本，如痰或气管抽吸物，分离军团菌，最好是在接种标本之前对其用酸进行去污染处理。标本用1：10的KCL-HCL缓冲液（PH2.2）稀释并在室温下孵化4min。重要的是孵化不得超过4min，因为军团菌在酸的作用下会慢慢失去活性。然后将标本接种到军团菌琼脂培养基（该培养基不含抗生素），该培养基应该培养于35℃、湿润环境下，至少5天。

肺炎支原体

肺炎支原体是引起非典型肺炎的主要病原体。因为肺炎支原体为苛养性而且生长很缓慢，决定性的诊断常常是基于血清学试验。当要求培养时，一般选择咽拭子；痰和其它呼吸道标本也可接受。标本采集后要立即放入含有蛋白质的运送培养基中，如白蛋白，青霉素可以用于减弱其它污染菌的生长。标本可以在运送培养基中，于4℃保存到48小时或-70℃冰冻更长一段时间。

洋葱假单胞菌

洋葱假单胞菌是患有囊性纤维化疾病患者重要的呼吸道致病菌。此菌在常规培养基中生长良好；但是选择性培养基，例如PC琼脂和OFPBL琼脂用以分离呼吸道分泌物中的洋葱假单胞菌效果会更佳。

衣原体

衣原体也是呼吸道的重要致病菌。沙眼衣原体可引起婴、幼儿的各种呼吸道疾病。肺炎衣原体可在所有年龄段致病，但是大多数严重患病的是幼儿和上了年纪的。鹦鹉热衣原体是动物的病原体但是偶尔也对人类致病。作支原体检验的标本应该放在一种培养基中（其中含有选择性抗生素），为了维持支原体的活性，标本应及时送往实验室，在实验室采用shell vial 技术接种于McCoy或buffalo green monkey 细胞。如果标本在48小时内不能及时处理，应将标本冷藏；如果更长的时间内不能处理，标本就得放入-70℃或更低温度。具体检验方法见有关章节。

奴卡氏菌

奴卡氏菌可以是重要的呼吸道致病菌。作培养的标本要立即送往实验室；但是短暂耽误时可放在4℃保存。标本直接涂片Gram染色镜下为精细、念珠状、Gram阳性菌、有分支、丝状或球杆状。奴卡氏菌具有部分抗酸性。培养奴卡氏菌没有特别的培养基；可生长在HBI沙保氏葡萄糖琼脂、羊血琼脂、或胰-豆胨琼脂。奴卡氏菌也可在分支杆菌的去污染处理中存活下来并在分支杆菌培养基中生长。对于污染严重的标本，如痰，推荐使用选择性BCYE琼脂（缓冲-活性炭-酵母粉琼脂）。培养于25—37℃，最好37℃，3周时间。

分支杆菌

要分离培养被污染的呼吸道标本中的分支杆菌，首先必须对标本进行去污染及浓缩处理。具体的一般使用去污染方法请参见相关内容。将标本离心涂片作一份抗酸染色找AFB。商品化的核酸扩增法可用于检测涂片AFB阳性的标本中的结核分支杆菌复合物。作培养时标本至少要接种于一份液体和固体培养基，培养至少6周，35℃，8% 的CO2环境。

上呼吸道标本

鼻咽部

鼻咽部抽吸物、灌洗液、及拭子标本有助于诊断百日咳、白喉和衣原体感染，以及识别出脑膜炎奈瑟氏菌或金葡菌的携带者。鼻咽部标本培养不用于中耳炎的诊断。但是从儿童鼻咽部分离肺炎链球菌，监测其耐药性具有流行病学价值。

博德特氏菌属

首选标本为鼻咽细胞，用含有藻酸钙或涤纶纤维的小头拭子采集标本。人造丝或棉拭子不能用，因为其所含的脂肪酸对菌体有毒害。最好是床旁接种，如果不行，拭子标本应放于特殊的运送培养基中送到实验室。如果在2小时内送到，可用1%的水解酪蛋白氨基酸作为保护剂。如果24小时内不能接种的就要用含活性炭的Ami培养基。如果运送时间超过了24小时，例如标本需要送到参考实验室作培养，标本就应该保存在R-L运送培养基中送检。

直接检验标本中的博得特氏菌用的是DFA法。用于检测抗体的方法有可能不能区分百日咳菌和副百日咳菌。通常情况下，DFA试验用于检测百日咳的敏感性和特异性都相当低，只能作为一种补充试验，不能代替培养。

用于培养百日咳博得特氏菌的培养基是R-L活性炭琼脂，含有10%的马血和头孢。因为只有很少的百日咳百日咳博得特氏菌株会被头孢所抑制。还是建议使用不含头孢的R-L培养基。此外，将标本接种于含有1/3琼脂的培养基表面；当此琼脂送到实验室后再将其进一步分离划线接种。培养条件：35℃湿润环境，5到7天，不需要CO2。

PCR可能是检测百日咳博得特氏菌最敏感的试验方法。首选涤纶拭子采集标本，因为棉和藻酸盐对PCR反应有干扰。关于百日咳博得特氏菌检验的标本的采集、运送和处理请参见有关内容。

白喉棒状杆菌

作白喉棒状杆菌培养，最好同时送检鼻咽拭子和咽拭子。如果采集标本后立即送检，对运送培养基和运送条件就没有特殊的要求。如果要将标本送到参考实验室去，建议将其放在不含干燥剂的干燥容器中使其保持干燥；也可以将标本放入Ami 或Stuart’s运送培养基，或者接种于Loeffler’血清或亚碲酸盐琼脂培养基上并在35℃、5%CO2环境预培养过夜。标本涂片诊断白喉，作Gram染色并检查多形性的Gram阳性杆菌，一端或两端膨大及有略带紫红色的异染颗粒。其它的染色法所见菌体形态与Gram染色的一致，但是不能区分白喉棒状杆菌和其它棒状杆菌。标本应该接种于Loeffler’s血清琼脂平板或含有亚碲酸钾的培养基分离培养白喉棒状杆菌。培养条件：35℃，5%CO2，2天。

肺炎衣原体

诊断肺炎衣原体经常是作血清学试验；当要求作培养时，鼻咽拭子标本最好。培养操作已经在前面的下呼吸道标本中作了描述。

金黄色葡萄球菌

鉴别金葡菌携带者是用聚酯纤维的拭子在前鼻孔处采集鼻分泌物，将其放入试管运送系统并立即送往实验室。将标本接种于含5%的羊血琼脂平板、一种Gram阳性菌的选择性培养基、或甘露醇盐琼脂，一种用于选择葡萄球菌并有助于区分凝固酶阳性与凝固酶阴性的葡萄球菌的培养基。培养于35℃，2天。

脑膜炎奈瑟氏菌

鉴别脑膜炎奈瑟氏菌的携带者时，采用鼻咽拭子标本并用Ami或Stuar’s运送培养基送到实验室；另外还可以将标本直接接种在平板培养基上并放入含有CO2的容器中送检。不用作Gram染色，因为脑膜炎奈瑟氏菌在形态上不能与其它的上呼吸道的普通奈瑟氏菌区别开。标本应该接种在营养丰富的培养基上，如血琼脂或巧克力琼脂；改良的TM，M-L，或纽约培养基也可以用。培养条件：35℃，5%CO2，72小时。

咽喉部

咽拭子标本通常大多数都用于诊断A群链球菌咽炎。送检到检验科用于作常规细菌培养的咽拭子标本只能从这点上评估和考虑。咽拭子标本应该插入含有改良Stuart’s培养基的试管中立即送检，如果不能及时送检就应暂时短时冷藏。

有许多用于快速检测A群链球菌的商品试剂，有EIA、发光免疫法、及以核酸为基础的试验。据报道，EIA的敏感率在60%到95%不等，但是也有低到了30%的。发光免疫分析法其敏感率也不同，但是有些报道其敏感率较EIA好些。总之，核酸基础试验 的敏感率＞90%。所有直接法的特异性一般都很高，在95到100%。当要作快速直接试验时，应该采集2份咽拭子。如果结果阳性，则废弃余下的拭子；如果结果阴性，另一份拭子用于作培养，因为直接试验的敏感率＜100%。培养A群链球菌，既可以用血琼脂也可以用选择性血琼脂。使用选择性血琼脂便于观察但是会延缓细菌的生长。应该培养35℃，48小时，培养于通过厌氧培养降低氧张力的环境，或培养于5—10% CO2环境，或者在空气环境中用盖玻片将最初培养物盖上。这些培养条件也可培养C群和G群链球菌，这些菌可引起咽炎但是不会引起A群链球菌后遗症。

特殊考虑的问题

会厌炎

咽拭子标本有助于确诊会厌炎的病原体，病程进展快的蜂窝组织炎有可能引起气道阻塞（几乎总是由流感嗜血杆菌b型引起，偶尔也由金黄色葡萄球菌或肺炎链球菌引起）。如果有必要，应该立即在病人插管处采集标本且只能由医生来操作。标本应接种于营养丰富的平板培养基，培养于35℃含有5—10% CO2环境，72小时。另外，会厌炎病原体的确认还可以通过血培养。

白喉

咽喉标本的培养对于诊断白喉十分重要。对标本的直接评估以及培养应参照前面鼻咽部标本部分所描述的进行操作。

溶血隐秘杆菌

溶血隐秘杆菌可引起咽炎和扁桃体周脓肿。此菌的培养可用培养A群链球菌的选择培养基。最好培养72小时。

淋病奈瑟氏菌

检验咽喉部的淋病奈瑟氏菌时，拭子标本应床旁接种或立即送检并尽可能接种于选择性培养基，例如TM培养基。培养于35℃，含有5—10% CO2环境，72小时。

其它标本

奋森氏咽峡炎是一种急性坏死性溃疡扁桃体炎,可以由梭杆菌属, 奋森疏螺旋体及其它厌氧菌引起。这种情况通常出现在口腔卫生不好的成年人及患有严重的系统性疾病的病人。实验室将从溃疡创面采集的拭子涂片作稀释石炭酸复红或Gram染色。镜下可见许多螺旋体，梭状杆菌，以及多核粒细胞就可初步诊断为奋森氏咽峡炎。对此作培养时不考虑需氧菌的培养，因为在口腔中有许多种厌氧菌；应该考虑作血培养，因为此疾病往往伴随有败血症。

组织标本

外科手术中采集的组织标本，考虑到其获得的成本费用很高而且还有病人所冒的危险。因此，要作出最佳的评估，就要采集足够的标本用以作组织病理学检验，同时也要作微生物学检验。组织病理学检验用以鉴别是感染还是肿瘤，而且也区分是急性的还是慢性的。对于慢性损害要鉴别诊断，所涉及的病原体有放线菌、布鲁氏菌、分支杆菌、及真菌；其中任何一种病原体的数量可能会很少。要强调的是采集标本是一定要有足够的量以供检查和培养。拭子很难满足量的需求，所以不予考虑。

采集到标本后，组织标本应该放入一无菌容器中并迅速送往实验室，防止标本干燥。一旦收到标本应将标本放入少量的无菌介质或无菌盐水中并均质化。用无菌的解剖刀将组织绞碎，用研钵和研棒或组织碾磨机或者用stomacher将其碾磨。碾磨好的标本用于涂片作Gram染色或其它染色（其特点如临床照片所示）并接种培养基。Gram染色应检查是否有微生物、粒细胞、及磷状上皮细胞（提示表面污染）。对于常规培养组织标本应接种于液体培养基和营养丰富的琼脂培养基以检出苛养菌。培养于35℃含有5到10% CO2环境。

特殊考虑的问题

骨髓

骨髓抽吸物最好是用溶解离心血培养系统的采集管来送检。当采集量少于7ml时采用儿科用采集管。骨髓也可以用无菌容器或含有抗凝剂的容器送检。然而，因含有抗凝剂，如肝素、枸橼酸钠和EDTA会对某些菌有抑制作用，所以还是不推荐用含有抗凝剂的容器。如果实验室选用了含抗凝剂的容器，就要及时告诉申请检验的医生此结果有局限性。

组织的定量培养

创伤的或热损伤的组织可送检作定量培养。如果结果为≥105CFU/ml，则预测有发展成为由伤口引起的败血症的可能性。就此操作的实用性存在两个问题：1.结果重复性不好；2.同组织学的检查相比其阳性预测价值很低。在作定量培养时，取部分标本称量及盐水中碾磨，将碾磨悬液作系列稀释并作系列培养。组织定量培养的细节请参见相关资料。

幽门螺杆菌

胃活检组织或刷检物可用于送检幽门螺杆菌,此菌是胃炎和消化性溃疡的重要致病菌。可将组织标本切片用Giemsa染色、苏木素-伊红染色或Warthin-Starry镀银染色可见到菌体，另外,用绞碎组织印片作Gram染色可发现菌体。尿素试验是一种直接检测幽门螺杆菌胃炎和消化性溃疡疾病的方法。此菌可产生大量的尿素酶，可将部分均质化的组织接种于尿素肉汤培养基或琼脂培养基而检测出该菌。另外，可直接放一小块组织于专门的商品试剂盒中检测。尿素试验可在15分钟内出现阳性，但是阴性报告要在24小时后发出。如果要培养检验幽门螺杆菌，要将在0.9%的盐水中均质化的活检组织接种在巧克力培养基、BHI、或加有马血或羊血的布鲁氏琼脂培养基上。培养幽门螺杆菌的最佳琼脂培养基还没确定。培养条件：35℃，微需氧，湿润环境，培养7天。

巴尔通体属

巴尔通体属是猫抓伤疾病和杆菌性血管瘤病的病原体。因为培养非常困难，对其诊断大多数情况下往往都根据临床表现和排除其它疾病或血清学试验分析。将固定的组织切片作Warthin-Starry镀银染色或作组织Gram染色可以发现菌体。培养……。(略)

其它病原体

军团菌属、奴卡氏菌属、白喉棒状杆菌以及分支杆菌都是组织疾病的潜在病原体。这些病原体的检验可根据上述方法。

尿标本

合适的尿标本采集方法包括留取中断尿（最好为清晨的第一次小便），导管导尿，以及耻骨上抽出尿。Foley导管头不能接收作培养，因其几乎都被尿道口的细菌所污染。最常用的标本是采集清洁的中段尿。所有的尿标本都要及时送往实验室并且要在采集后的2小时内处理好。如果不能及时送检，可将标本冷藏，最多不超过24小时。可用专门采集尿标本的商品试剂盒，其中含有防腐剂用以在室温24小时内可以维持尿标本中菌量的稳定，但还是不及冷藏好。

健康人的尿道口上段的尿路是无菌的，但是尿道口正常情况下都有许多不同的细菌，所以采用非侵入手段采集尿标本在排尿时易被污染。所以要定量培养，将共生菌与潜在的病原菌区分出来。最初培养菌落计数有＞105CFU/ml则高度提示有感染，但是此标准针对不同情况下作了修改。例如，对于患有尿道综合征的年青、性活跃的妇女，伴随有脓性尿而细菌计数只有102CFU/ml时都认为有意义。对于婴幼儿和儿童、男性病人、有尿道插管的病人、最近进行了抗生素治疗的、刚喝了大量水的、有症状并伴随有脓尿的患者、有尿路梗阻者、或者患有血源性肾盂肾炎者，真正尿路感染时其菌落计数可能不到105CFU/ml。值得注意。

直接检验尿标本有许多方法，用作筛选试验用以快速识别那些很可能不会检出在临床上有意义细菌的标本，将其筛选掉。当以菌落计数＞105CFU/ml为参考时，这些筛选试验的相关性很好，但是在菌落计数少的情况下顺利作出的比较很少。与试剂相比用Gram染色筛选尿标本即快速又节约成本。用未离心尿标本准备的涂片在高倍镜下镜检，每视野中有一个以上的细菌就相当于培养菌落计数有＞105CFU/ml，其相关性很好。有一种作dipstick试验的商品试剂含有硝酸盐还原酶(大多数引起尿路感染的Gram阴性杆菌都产此酶)和白细胞酯酶(一种中性粒细胞产生的酶)，快速、便宜、及操作简单，但是其敏感性较低。

有几款尿标本自动化筛选系统商品。……（略）

尿标本的定量培养是将其接种在合适的培养基上，常用的有血琼脂和麦康凯琼脂，用于计数，最通常的方法是用标定好的塑料的或金属丝的接种环取一定量的标本接种于琼脂培养基。0.001ml的接种环用于接种所有的尿标本，除此之外，怀疑患有急性尿道综合症的妇女的尿标本和耻骨上方穿刺尿要用0.01ml的接种环接种。接种环要垂直插入充分混匀的标本中，小心取出满环的尿标本涂抹在琼脂平板表面——从上向下垂直划一直线，再垂直于此线从上朝下来回向两边划开。培养于35℃，5—10% CO2环境。

特殊考虑的问题

钩端螺旋体

肾脏沟端螺旋体在发病的第一周后可以从尿标本中发现并可持续几个月。尿标本应该尽快处理，因为酸性会损害菌体。如果不能及时送检，就要用1%的牛血清将其按1：10稀释并存放于5至20℃。将未稀释的和按1：10、1：100、1：1000稀释的标本都接种于Fletcher’s、Ellinghausen-McCullough/Johnson-Harris、或Polysorbate 80 培养基，含有和不含新霉素的培养基都要接种。培养于室温下至少6周。

分支杆菌

检验分支杆菌可按前面所述方法来处理。

细菌抗原检测

……。（略）

伤口和脓肿标本

理论上，化脓性标本是用针和注射器抽吸采集，再移入无菌容器内，立即送往实验室。如果没有得到抽吸物，也可以用拭子在伤口深部采集渗出物。起码要采集2份拭子标本，一份用于培养，另一份用于涂片染色。其所有标本都要用含有改良的Stuar’s培养基的运送试管送检。拭子标本不宜用作厌氧菌培养。但是，如果只能采集到拭子作厌氧菌培养，那么必须用厌氧运送试管系统送检。标本要立即送往实验室。如果不能及时送检，应将标本放在冰箱中冷藏，但是作厌氧菌培养的标本只能放于室温下。标本的处理包括涂片作Gram染色和选择合适的培养基接种。如果是拭子标本，就不要接种肉汤培养基，因为用拭子接种于肉汤培养出的细菌几乎没有意义。

要发挥实验室的有效作用，选择正确生理部位和采集合适的标本及其正确运送等环节最为重要。标本的采集和处理应该优先考虑，否则，实验室所做的工作几乎没有什么价值。因此，所有与标本质量的各环节有关的医务工作者必须要了解在整个实验过程中保证标本质量的重要性和必要性。实验室有责任提供相关信息资料，使之编入各科室的护理手册中。包括详尽的安全标准，标本的选择、收集、运送、接收和填写及粘贴标签的标准。在此手册中为您提供了临床微生物实验室的送检标本的正确采集和处理指南。

安全指南

对于实验室工作人员最先考虑到的应是实验台的安全。其他医务人员也许没在意在送往实验室的标本中潜在有病原体。所以要制定安全规章制度以保护实验室人员和其他可能接触到病原体的人员。大多数的微生物实验室的手册中都有实验室安全操作章节部分，实验室操作手册中还应该包括有关标本管理的安全操作的内容。有关生物安全的参考资料对于每个微生物实验室都适用。适用于实验室的安全参考资料应该包括有‘微生物实验室和生物实验室的生物安全指南，第三版’,以及实验室的生物安全指南：‘谨慎操作和处理传染性材料准则’。

直接有关标本的安全管理方针：

1. 所有采集标本的操作要戴手套，穿工作外套、口罩、甚至护目镜。

2.所有标本容器必须防漏，运送也应装入密封防漏的塑料袋中，袋上附有一表格用于填写日期、时间、姓名之用。

3.决不能将针头暴露的注射器送到实验室。应将注射器中的标本注入无菌试管中。或采用防护手段取掉针头，再盖上注射器并放入密封防漏的塑料袋中送检。

4.不得将装有标本的破损容器送往实验室，也不能对其进一步处理。应该及时向医生通报容器渗漏，解释如果留用标本，会带来的潜在危害性并要求重新送检。如果新标本送来，则将泄漏的标本高温高压处理后再废弃掉。

标本的选择与采集

采集送检标本前，必须有所选择标本的种类和采集部位并要反应有效病程。如果不选择有效部位，再好的方法采集的标本，没有有效病原体也没多大临床价值。以下为普通标本的选择与采集指南：

1. 要避免常居菌群随时可能造成的污染，以确保取得反映感染过程的典型标本。有许多感染部位的病原体当存在于健康宿主时却被认为是正常菌群。这种正常菌群的“背境噪音”（即来源于皮肤、隔膜和呼吸道）会对培养结果有干扰，过度生长的正常菌群也会掩盖真实病因。

2. 选择正确的解剖学部位获取标本，采用适当的技术和适当的用品，如表中所述。

3. 厌氧菌培养标本所选择的适当部位参见表1，活检组织或穿刺液是很好的标本，而厌氧拭子送检是起码的要求。决不可冷藏用作厌氧培养的标本，而应置于室温下。

4. 采集的标本要足量。标本量少了会产生假阴性结果。

5. 每份标本都应贴上标签，写上病房、病人姓名、ID号、标本名称、明确的部位、日期、采集时间和采标本人姓名等。

6. 将标本放入特制的容器，此容器应有利于可疑病原体的存活，防渗漏，无安全隐患。

病毒、立克次体、衣原体、以及支原体的标本运送

（略）

标本的送检

1. 所有标本都必须立即送往实验室，最好在2小时内。如果不能及时送检，细菌病原体待检标本可按表2中规定的条件下存放。

2. 通常用于细菌学检验的标本的存放不要超过２４小时。而病毒检测的标本可于４℃存放2—3天。

3. 最佳的临床标本送检，包括厌氧菌培养标本，首先取决于所获取标本的量。量少的标本要在采集后的15－30分钟内送检。活检组织如果采用厌氧运送方式，可于25℃存放20至24小时。

4. 对环境敏感的细菌包括有志贺氏菌（立即处理）、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌和流感嗜血杆菌（对低温敏感）等。决不能冷藏CSF、生殖器标本、眼部标本和内耳道标本。

5. 临床标本或传染性材料从一个实验室到另一个实验室的送检，不论距离长短，都要求严格注意标本的包装和标签说明。所要运送的材料必须贴上适当的标签，包装得当。送检期间要予以安全防护。

标本的接收和拒收标准

有时，送到实验室的标本选择部位不当、采集和运送不当。这些在本质上属于标本失控。失控的过程也必须予以同样的重视。就象对待失控的鉴定和药敏试验一样；必须予以纠正。失控标本得出的结果会给医生提供错误的信息，导致误诊和治疗不当。因此，实验室必须坚持一条严格的标本接收和拒收准则。

以下列举了几条明确的实验室准则,必须使其成为制度,予以执行，以保证标本质量:

1.无标签的标本，不接收。与采集标本的医生或护士联系。对于非侵害性方式获取的标本（尿;痰;咽喉部标本）要求重新采集送检。对于侵害性操作获取的标本（穿刺液;体液或组织）只有在与采集此标本的医生商量之后，方可接收检测，并要在报告上注明此问题，将其记录存档。

2.延误的标本，不接收。警告送检者并要求其重新送检。在报告中注明“送检延误”。

3.送检容器不当或渗漏，不予接收。告知送检者并要求重新送检。

4.标本不合要求（如厌氧培养标本却按需氧培养标本送检），不接收。联系送检者，阐明试验要求。说明其不同之处。要求其再送检符合试验要求的标本。

5.同一天申请作同一试验的重复送检标本，不接收。在标本中放入合适得防腐剂，置于适当温度。与送检者联系并说明标本重复不予处理。在报告单上予以注明。

也有例外的情况，就是即使得到的标本质量不好也必须要作检测，例如情况特殊或取材困难或感染疾病的咨询等。表３列出了一些不能为临床提供有价值信息的标本 ，应取消试验。

无菌体液可能来自严重感染或生命垂危的患者。必须迅速而正确地处理标本。体液标本是否离心、是否接种琼脂平皿、是否接种血液培养瓶都必须根据实验规程来决定。表４列出了一些处理无菌体液标本的建议。

标本的管理

针对于大多数临床实验室接收到的常见标本，表５到表10提供了各标本的管理特点，包括细菌学，真菌学，病毒学和寄生虫学。

表１.各种适于厌氧菌培养的临床取材

表2 各种标本运送方式及可疑致病菌的保存条件

表3 无临床价值的标本

表4 无菌体液的标本处理

标本处理规程

正确采集和处理标本是诊断感染性疾病的关键。在前面已经讲了标本的采集和运送指南。实验室有责任指导临床正确地采集和运送标本，这就要求实验室提供实验室手册印刷品。若有必要实验室也可以提供培训。若实验室的策略和规程有变化应该及时予以传达。

实验室一旦接收到标本，应该马上在检验申请单上签上收到日期和时间。许多实验室是用印章盖上的方式。此时，应该检查标本和申请单以确保其达到所要求的接收标准。要建立标本接收的最低标准，同时要有不合格标本（未达到接收标准）的拒收指南。在某些情况下对一些标本应拒绝作培养，见表1。一旦确定拒收标本，就一定要及时通知提供标本的医护人员，以便及时重新采集合格的标本送检。

表1 拒收标本的标准

运送标本的温度不合适

所用运送培养基不合适

运送标本的时间过长

标本容器上未贴标签或贴错了标签

标本泄漏

容器有裂缝或被打破

标本明显被污染

拭子上的标本干掉

标本不适合于作所要求的试验

标本使用了固定剂及防腐剂

标本量不够

24小时内重复送检的标本（血培养除外）

微生物检验申请单和标本标签应该包含以下信息：患者姓名、年龄、性别、住院号及住院科室或地址；申请医生的名字、标本名称、标本采集的日期和时间；以及检验目的和诊断等。如果填写不全，实验室应该在处理标本前要求负责提供此标本的人员将漏掉的信息补上。如果标本不符，要求其重新采集。只有采集困难的标本才可以不重新采集，例如在手术中采集的组织标本或脑脊液，但要与临床联系沟通；并且要对这些异常情况实验室都应作好记录存档。

所有的患者的标本都应该视为具有传染性，并要按照标准预防措施进行标本处理。此标准预防措施相当于以前通用的预防措施，其设计用以降低来自于明确传染源和不明传染源的微生物传染的危险性。在大多数实验室，专门划出一块区域用于临床标本的接种处理。严格地说，除了呼吸道标本的一般处理和做真菌或分支杆菌检测的送检标本的处理外，其它所有标本的处理都应该在II级生物安全柜中进行。要带手套，以及防渗透的隔离服、口罩，护目镜（或塑料防护罩）主要用于预防标本的飞溅或汽雾的污染。

在制订标本处理规程、准备培养基以及建立日常用于快速、经济地诊断感染性疾病的实验方法时，实验室要特别考虑到特殊患者群体、某些疾病在特殊地区的发病率以及相关的病史和/或现行治疗法。

此章节的余下部分还有特别关于接收微生物标本的评估处理指南。分为四部分：细菌学，病毒学，真菌学，以及寄生虫学。每部分按标本种类进行组织，其中介绍了标本的处理、直接检测的方法步骤、以及如何从这些标本中培养检出微生物。

细菌学

通则

细菌感染的成功的实验室诊断依赖于许多方面。适当的标本选择、采集、和运送应符合标准，以保证所采集标本能典型反映病程，要尽量避免标本被邻近组织的微生物污染。实验室有责任拒绝采集和运送不合格的标本。实验室一旦接收到标本，就要根据标本的类型对标本小心地进行处理，选择合适的培养基和选择适当的培养条件。

大量引起感染的病原体对微生物工作者都具有挑战性，促使微生物工作者要建立合理的方式方法来处理所有的标本。在接种标本之前，某些标本还需要进行初步的处理，如标本的稀释，浓缩，混匀，或去污染等等。大多数细菌学送检标本都应该作Gram染色直接镜检；而且如果怀疑有分支杆菌还需要作抗酸染色检测抗酸杆菌。其它直接检测标本的方法，如荧光抗体（DFA）染色、酶免法（EIA）、以及DAN杂交或扩增技术测定只能有选择性地用于一些特殊情况。分离培养细菌时，通常是采取多种培养基组合使用；包括有营养培养基、选择性培养基、非选择性培养基、或特定的培养基等。大多数的常规培养是在35～37℃；但是，有些病原体的最适生长温度却高于或低于这个范围。培养时还需要选择不同的气体环境，包括有大气环境、二氧化碳环境、微需氧环境、及厌氧环境。

这部分的目的是讨论、推荐检出病原菌的标本处理规程。这些内容没有包含所有情况，也不一定适用于所有实验室。建议初步使用的需氧菌、厌氧菌培养的培养基都已概括排列在表2中。

表2微生物标本染色及接种培养基的推荐表(不包括血液)

aB，血琼脂Th；C，巧克力血琼脂；Mac，麦康凯琼脂；Th， 巯基乙酸盐肉汤；Ca，弯曲菌琼脂；HE，HE琼脂；EB，营养加强肉汤；SSA，A群链球菌选择琼脂；TM，TM琼脂平板；BCYE，BCYE培养基；TCBS，TCBS培养基；CIN，CIN培养基；BBA，布鲁氏菌血琼脂；LKV，含kan-van无血培养基；BBE，类杆菌属胆汁七叶苷；CAN，厌氧菌多E-奈啶酸培养基；CCFA，环丝氨酸-头孢西丁-果糖琼脂。

作厌氧菌培养的标本一定要正确采集。