产品介绍
一代测序（3730XL）平台
一．简介
DNA测序是重要的分子生物学分析方法之一，它不仅为基因表达、基因调控等生物学基础研究提供重要数据，而且也在疾病诊断、基因治疗等应用研究中起着重要的作用。
DNA测序技术特点：(1) 自动化操作。(2) 快速电泳，3小时左右即可达到测序要求。(3) 新型液体分离胶使读序长度达1100bp，精确读序达800bp。(4) 新型碱基识别与质量评分软件提高了测序准确性。(5) 电泳温度可达70℃，有助于去除二级结构的影响。(6) 高灵敏度提高了测序模板DNA的浓度适应范围。(7) 良好的温控装置保证了片段分析准确性及重现性。(8) 毛细管内荧光检测，灵敏度高。(9) 双光束双侧激光激发，荧光信号强度高度均一。
二．检测原理
双脱氧链终止法，又称为Sanger法，基本原理如下：DNA模板在DNA聚合酶、引物、四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP）存在下进行复制，在四管反应体系中分别按一定的比例引入四种双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基团，当ddN-TP掺入链的末端时，该链就会停止延伸。如此每管反应体系中就产生了一系列长度不等的以ddNTP为3’端的DNA片段。
三．应用领域
(1) DNA常规测序提供多种样品类型的测序服务，包括菌(菌液、穿刺菌、平板)、质粒和PCR产物(原液、已纯化)。根据不同样品和客户需求，还可以提供：
A. 质粒提取。 B. PCR过膜纯化。 C. PCR切胶纯化。 D. 菌液活化。 E. 单个样品的克隆测序。
F. PCR扩增等常规分子生物学实验。 G. 长片段walking测序后的序列拼接等生物信息学分析的服务。
(2) 重测序
A. 引物设计与合成：针对客户感兴趣的DNA区域，可以为客户提供包括PCR扩增引物和测序引物在内所有引物的设计与合成。
B. PCR服务：包括PCR扩增和产物纯化。
C. 测序服务：采用ABI 3730XL测序仪进行重测序反应。整个测序反应和上机过程，均由专业的人员严格按照操作流程完成。
D. 数据分析服务：对整个重测序实验的结果进行初步分析。
四．样品要求
(1) PCR原液
A. 片段通常大于200bp。 B. 提供浓度大于100ng/μl，体积大于20μl。 C. 2μl电泳检测条带清晰，有主带。
(2) 已纯化PCR产物
A. PCR产物溶于超纯水中。 B. 浓度大于20ng/μl，体积大于10μl。 C. 电泳检测条带单一。
(3) 质粒要求
A. 质粒浓度大于50ng/μl，体积大于10μl。 B. 建议使用相关试剂盒提取。 C. 大质粒需要注明载体长度。
(4) 菌液模板要求
A. 需说明载体的抗性，我们主要提供Amp、Kan、Chl、Tet四种抗生素。
B. 对于低拷贝质粒建议直接提供500ng以上纯化质粒。
C. 提供200μl-1ml左右的过夜培养菌液，离心管中封口保存，防止交叉污染或泄漏。
D. 建议尽量提供穿刺培养的菌种，或用新鲜的菌装到冰盒里运输。
(5) 引物要求
A. 浓度大于3.2μmol/l，体积大于10μl。 B. 随机引物和兼并引物不适合测序。 C. 尽可能提供引物退火温度。
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