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水产品中孔雀石绿和结晶紫的快速测定方法液相色谱-串联质谱法依据标准

（SN/T1768-2006）
 

样品前处理

? 准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中，先加入提取剂1 (液体20.0 mL)，用匀浆机以8 000 r/min的速度均质30 s。
? 再加入提取剂2 (固体粉末), 振荡1 min，4 000 r/min离心5 min。取上清液5mL于50mL试管中，加入10～15mL水混匀，备用.

SPE净化

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高效液相色谱-串联质谱条件  
a) 色谱柱：C18柱，150 mm×2.1 mm(i.d.)，
5 µm；
b) 流动相：乙腈+5 mmol/L乙酸铵(75/25,V/V)；
c)  流速：0.2 mL/min；
d)  柱温：35℃；
e)  进样量：10 µL；
f)  离子源：电喷雾ESI，正离子；
g)  扫描方式：多反应监测MRM；
h)  雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到要求；
i)  喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度；
j)  监测离子对：孔雀石绿m/z 329/313（定量离子）、329/208；隐色孔雀石绿m/z 331/316（定量离子）、331/239；结晶紫m/z 372/356（定量离子）、372/251；隐色结晶紫m/z 374/358（定量离子）、374/238。

分析谱图

水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的快速测定方法高效液相色谱法

依据标准（SN/T1768-2006）

样品前处理

? 准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中，先加入提取剂1 (液体20.0 mL)，用匀浆机以8 000 r/min的速度均质30 s。 ? 

   再加入提取剂2(固体粉末)， 振荡1 min，4 000 r/min离心5 min。取上清液5mL于50mL试管中，加入10～15mL水混匀，备用。  

SPE净化

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液相色谱条件
a)  色谱柱： C18柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，5µm；
b)  流动相：乙腈+乙酸盐缓冲液①(80/20，V/V)；
c)  流速：1.0 mL/min；
d)  柱温：室温；
e)  检测波长时间程序： 0 min～5.0 min，618 nm； 5.0 min～12 min，588 nm；12 min～18 min，267 nm。

分析谱图

                图1  标准品色谱图

备注
①为称取4.950 g无水乙酸钠及0.950 g对-甲苯磺酸，溶解于950 mL水中，用冰乙酸调节溶液pH到4.5，最后用水定容到1 000 mL。

水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定方法高效液相色谱荧光检测法

（GB/T20361—2006）改良法

样品前处理
? 准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中，先加入提取剂1 (液体20.0 mL)，用匀浆机8 000 r/min均质30 s。
? 再加入提取剂2 (固体粉末)，振荡1 min，4000 r/min离心5 min。取上清液5.0 mL于50mL离心管中，向离心管中加入15mL蒸馏水稀释上清液，混匀，备用。
 

SPE净化

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液相色谱条件
a)  色谱柱： CN柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，粒度5µm；
b)  流动相：乙腈+乙酸盐缓冲液(50/50，V/V)；
c)  流速：1.0 mL/min；
d)  柱温：室温；
e)  激发波长：265nm
    发射波长：360nm
f)  进样量：20 µL

分析谱图

          图1 5ng/mL孔雀石绿、结晶紫标准品色谱

                图3  空白虾样品色谱图

         图3  空白虾样品添加20ng/g孔雀石绿、结晶紫标准品色谱图

         图4  标准品、空白虾样品、空白虾样品添加合并色谱图