来宝网 2011/3/11点击6427次
凝胶过滤填料的选择
在进行凝胶过滤分离样品时，对凝胶的选择是必须考虑的重要方面。一般在选择使用凝胶时应注意以下问题:
1.混合物的分离程度主要决定于凝胶颗粒内部微孔的孔径和混合物相对分子质量的分布范围。和凝胶孔径有直接关系的是凝胶的交联度。凝胶孔径决定了被排阻物质相对分子质量的下限。移动缓慢的小分子物质，在低交联度的凝胶上不易分离，大分子物质同小分子物质的分离宜用高交联度的凝胶。例如欲除去蛋白质溶液中的盐类时，可选用SephadexG-25。
2.凝胶的颗粒粗细与分离效果有直接关系。一般来说，细颗粒分离效果好，但流速慢；而粗颗粒流速快，但会使区带扩散，使洗脱峰变平而宽。因此，如用细颗粒凝胶宜用大直径的层析柱，用粗颗粒时用小直径的层析柱。在实际操作中，要根据工作需要，选择适当的颗粒大小并调整流速。
3.选择合适的凝胶种类以后，再根据层析柱的体积和干胶的溶胀度，计算出所需干胶的用量，其计算公式如下:
干胶用量/g＝πr2h/溶胀度(床体积/g干胶)
考虑到凝胶在处理过程中会有部分损失，用上式计算得出的干胶用量应再增加10%-20%
附凝胶过滤填料的简要说明
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系列/名称 |
分离范围 |
颗粒大小µm |
应用 |
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Sepharose FF系列 |
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Sepharose 6 FF |
10000~4000000 |
45~16 |
质粒、病毒 |
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Sepharose 4 FF |
60000~20000000 |
45~16 |
病毒、rHBsAg等巨大分子 |
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Sepharose xB系列 |
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Sepharose 2B |
70000~40000000 |
60-20 |
大分子复合物 |
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Sepharose 4B |
60000~20000000 |
45-16 |
病毒等大分子 |
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Sepharose 6B |
10000~4000000 |
45-16 |
大分子 |
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Sepharose CL-xB系列 |
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Sepharose CL-2B |
70000~40000000 |
60-200 |
大分子复合物 |
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Sepharose CL-4B |
60000~20000000 |
45-165 |
病毒等大分子 |
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Sepharose CL-6B |
10000-4000000 |
45-165 |
大分子 |
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Sephadex G系列 |
10000~4000000 |
45-16 |
大分子 |
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Sephadex G-10 |
小于700 |
40-120 |
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Sephadex G-15 |
小于1500 |
40-120 |
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Sephadex G-25coarse |
1000-5000 |
100-300 |
脱盐及更换缓冲液用 |
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Sephadex G-25medium |
1000-5000 |
50-150 |
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Sephadex G-25fine |
1000-5000 |
20-80 |
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Sephadex G-25superfine |
1000-5000 |
10-40 |
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Sephadex G-50 coarse |
1500-30000 |
100-300 |
小蛋白、多肽的分离 |
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Sephadex G-50 medium |
1500-30000 |
50-150 |
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Sephadex G-50 fine |
1500-30000 |
推荐仪器
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