来宝网移动站

组蛋白修饰检测的核心原理是通过实验手段来鉴定组蛋白上不同修饰位点的存在和位置。质谱是最常见鉴定翻译后修饰的方法，尤其是LC-MS/MS，可以高通量地分析组蛋白样品。

1.组蛋白提取：首先，需要从生物样本中提取组蛋白。这可以通过细胞抽提或组织抽提等方法来实现。

2.化学标记或抗体富集：提取的组蛋白通常会经过化学标记（如TMT或iTRAQ标记）或抗体富集。这些标记或抗体可以选择性地与特定修饰的组蛋白结合，以将它们从混合的组蛋白样品中富集出来。

3.质谱分析：经过标记或富集的组蛋白样品会通过质谱技术进行分析。常见的质谱技术包括液相色谱质谱联用（LC-MS/MS）和飞行时间质谱（TOF-MS）等。

4.数据分析：质谱数据会经过生物信息学分析，以确定组蛋白修饰位点的存在和位置。通常包括数据库搜索、定量分析和统计分析等步骤。

此外，以下几种方法也可以用于分析组蛋白的翻译后修饰情况：

1.免疫印迹（Western Blot）:

这种技术用于检测特定的蛋白质，包括特定的组蛋白修饰。通过使用针对特定修饰（如乙酰化、甲基化）的抗体，可以检测特定的组蛋白修饰。

2.免疫荧光（Immunofluorescence）:

在这种技术中，使用特异性抗体标记细胞中的组蛋白修饰，并通过荧光显微镜观察。

3.染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）:

这种方法用于研究特定的DNA片段是否与特定的组蛋白修饰相关。通过使用针对特定修饰的抗体捕获染色质片段，然后通过PCR、测序或其他方法进行分析。

4.酶联免疫吸附测定（ELISA）:

类似于免疫印迹，这种技术使用抗体来检测特定的蛋白质和修饰。ELISA适用于快速筛选和定量分析。

以上每种技术都有其优势和局限性，研究者通常会根据研究目的和样本类型选择适当的方法。例如，质谱提供最详细的修饰信息，但技术要求高且成本较高；而免疫印迹则相对简单，但信息量较少。

图1.组蛋白翻译后修饰鉴定研究路线

>>点击了解更多优质服务项目