来宝网 2025/9/26点击77次
TMT（Tandem Mass Tag）蛋白质测序是一种先进的质谱技术，用于定量比较不同样本中蛋白质的表达水平。TMT标签是一组化学标记物，可以共价结合到蛋白质或肽段的氨基端和赖氨酸侧链上。通过质谱分析，这些标签允许同时定量分析多达16个不同样本中的蛋白质表达差异。TMT蛋白质测序技术特别适用于复杂生物样本中的蛋白质组学研究，包括疾病机理研究、药物作用机制探索和生物标志物的发现等。
一、TMT蛋白质测序的关键步骤
1.样本准备：
从待分析的样本中提取蛋白质，并通过酶（通常是胰蛋白酶）进行消化，产生肽段混合物。
2.标记：
将不同的TMT标签分别添加到不同样本的肽段上。每个TMT标签都具有独特的质量，使得标记的肽段可以在质谱分析中被区分开来。
3.混合：
将所有标记过的样本混合在一起，这样可以在同一质谱分析中同时处理多个样本。
4.液相色谱分离（LC）：
通过液相色谱技术对混合的肽段样本进行分离，以减少样本复杂性，提高质谱分析的分辨率和灵敏度。
5.质谱分析：
通过质谱仪进行分析，测定肽段的质量和碎片模式。TMT标签允许通过检测标记肽段的相对强度来定量比较不同样本中相同蛋白质的表达水平。
6.数据分析：
使用专门的软件对质谱数据进行处理和分析，识别蛋白质并定量比较它们在不同样本中的表达差异。
二、优点
高通量：可以同时分析多个样本，大大提高实验效率。
高灵敏度：TMT标签提高了检测低丰度蛋白质的能力。
高精确度：定量分析的准确性和重复性高。
三、应用
TMT蛋白质测序广泛应用于蛋白质组学研究，特别是在疾病生物标志物的鉴定、药物靶点的探索、以及基础生物学过程的研究中。通过比较健康与疾病状态、不同时间点或不同处理条件下的蛋白质表达差异，研究人员可以获得有关生物学机制的重要信息。
