蛋白质组测序对样品的要求
来宝网 2025/7/9点击112次
蛋白质组学测序对样品的质量和处理有着严格的要求，以确保实验结果的准确性和可重复性。以下是进行蛋白质组测序时对样品的主要要求：
图1. 蛋白质质谱测序原理
一、样品纯度
高纯度：样品中的蛋白质需要尽可能纯净，避免核酸、脂质和其他非蛋白质成分的干扰。
去污染：避免外源性蛋白质（如酶、抗体等）的污染，这些可能来自实验材料或操作过程。
二、样品浓度
适宜浓度：样品的蛋白质浓度需要达到质谱分析的最低要求，通常需要使用特定的方法（如BCA、Bradford或Lowry）准确测定。过低或过高的蛋白质浓度都会影响实验结果。过低的浓度可能导致目标蛋白质在质谱分析中难以检测，而过高的浓度可能导致仪器过载或样品处理困难。
三、样品量
足够的样品量：除了浓度，总的样品量（即总蛋白量）也是一个重要考虑因素。根据所使用的质谱仪器和分析方法，所需的样品量可以从微克到毫克不等。
四、样品保存和处理
适当保存：样品应在适当的条件下保存，通常是在-80°C下冷冻保存，避免反复冻融，以防蛋白质降解或变性。
温和处理：样品处理过程应尽量温和，避免使用强力的物理或化学方法，以防蛋白质变性或降解。
五、样品兼容性
质谱兼容性：样品处理过程中使用的试剂和缓冲液应与后续的质谱分析相兼容，避免使用可能干扰质谱检测的试剂，如含有高浓度盐、去垢剂或某些防腐剂。
六、特殊样品
对于凝胶条带，SDS-PAGE凝胶分离的蛋白质样品，KOMAS和SYPRO Ruby染色的蛋白质条带与质谱鉴定具有良好的兼容性。但对于银染蛋白，不得使用戊二醛作为固定剂，否则会影响后续的质谱分析。
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