来宝网移动站

检测sumo化修饰

来宝网 2025/6/24点击146次

SUMO修饰(Small Ubiquitin-like Modifiers)是蛋白质翻译后修饰的一种。它的改性加工形式多种多样,种类也很多。SUMO修饰主要在核蛋白组装、维持基因组完整性、调节细胞内信号通路等方面发挥重要作用。成熟的蛋白质药物经过一系列翻译后修饰,具有特定的生物活性。天然修饰的蛋白质药物需要确定修饰类型、识别修饰位点、分析修饰结构。并对其特异性、准确性和稳定性进行了测定。因此,根据待测蛋白质或多肽的SUMO泛素化修饰,可以获得蛋白质药物或多肽链的生物学特性,从而揭示蛋白质或多肽的SUMO泛素化修饰位点和结构。


SUMO化修饰通常涉及以下几个步骤:

1.SUMO的成熟与激活:

SUMO蛋白质在成熟后,会通过特定的E1激活酶被激活。


2.SUMO的结合:

激活后的SUMO通过E2结合酶传递给目标蛋白。


3.共价结合:

最后,SUMO与目标蛋白质共价结合,通常是通过E3连接酶的帮助。


图1. SUMO修饰原理图


要检测SUMO化修饰,通常可以采用几种方法:

1.免疫印迹(Western Blot)分析:

这是最常见的方法之一。通过使用针对SUMO和目标蛋白的特异性抗体,可以检测到蛋白质是否发生了SUMO化修饰。SUMO化会导致蛋白质分子量的增加,从而在凝胶上呈现出比未修饰蛋白更高的迁移率。


2.免疫沉淀(Immunoprecipitation):

通过免疫共沉淀技术,可以用SUMO特异性抗体捕获SUMO化的蛋白质,然后通过免疫印迹分析或质谱来鉴定SUMO化的靶蛋白。


3.质谱(Mass Spectrometry):

质谱是检测和鉴定SUMO化位点最强大的工具之一。通过质谱分析,可以精确地鉴定出SUMO修饰的确切位点,并定量分析SUMO化修饰的丰度。这通常涉及到蛋白质的消化,然后利用液相色谱-质谱(LC-MS/MS)技术进行分析。


图2. 生物样品中 SUMO 化质谱表征的一般工作流程


>>点击了解更多优质服务项目

推荐仪器
  • *
  • *
  • *
  • *