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二噁英---免疫学方法 

（中国科学院广州化学研究所分析测试中心）

高工--189---3394---6343

　　由于色谱学方法的复杂及昂贵，因此一些较为快速简便的方法被发展，以满足环境监测需要。免疫学方法以其选择性好、灵敏度高，在很多方面得到了应用，自七十年代起人们也开始探索其在二恶英检测中的使用。1978年Philp等采用双抗体放射免疫分析检测了环境样品和生物样本中的多氯代二苯并二恶英，检测限为25pg。检测原理为碘125（I125）标记的二抗与二恶英竞争性地与一抗结合，然后检测沉淀物中放射性的减少而定量。检测使用的是多克隆抗体，抗体是使用1-氨基-3，7，8-三氯代二苯并二恶英与免疫原性蛋白（牛血清白蛋白和甲状腺球蛋白）结合后，免疫新西兰大白兔得到。用于溶解待测物质的溶剂也是反应的关键之一，这是由于二恶英为疏水性，而抗原、抗体反应为水溶性反应，因此溶剂的选择是十分重要的。反应中用于溶解疏水性二恶英的溶剂是非离子去垢剂Cutscum和Triton。经过合适的净化程序，该过程主要的干扰物质为多氯代二苯并呋喃。由于单克隆抗体技术的发展，在二恶英检测方面使用了单克隆抗体。在检测技术方面，出现了酶竞争性免疫分析和酶联免疫吸附分析（ELISA）。1986年Stephen 等，使用I125标记单克隆抗体检测氯代二苯并二恶英，他们使用的抗体与牛血清白蛋白-TCDD结合的能力是与牛血清白蛋白-苯胺结合能力的200倍。并且他们采用固相免疫反应，大大缩短了检测时间。1987年Larry等检测了五种对多氯代二苯并二恶英/呋喃单克隆抗体的特异性。他们的研究表明，这五种抗体都能识别四和五氯代二苯并二恶英，而不能识别无、单、六、十氯代二苯并二恶英和无、十氯代二苯并呋喃及1，2，3，4，8，9-六氯代二苯并呋喃。对多氯联苯，仅有其中两个抗体可轻微识别3，3’，4，4’-四氯联苯。其中特异性最高的两个抗体，完全不与多氯联苯、五氯酚、2，4-二氯苯氧基乙酸、三氯酚、2，4，5-三氯苯氧基乙酸这些干扰物质反应。检测采用ELISA法，检测限为0.5ng。Nukio等以多克隆抗体，采用ELISA检测多氯代二苯并二恶英在最适条件下，检测限为240pg/mL，线性范围为40-4800 pg/mL。在检测中他们使用的溶剂是二甲基亚枫和甲醇。在共平面多氯联苯的免疫学分析方面，Ya-Wen Chiu等设计的单克隆抗体可识别含3，3’，4，4’-四氯取代的共平面同系物，检测限可达ppb级。
　　免疫学方法与色谱学方法在二恶英检测方面主要优势在于：（1）所需时间较短，通常检测过程仅需数个钟头；（2）操作较简单，包括样本前处理和检测过程，对检测人员要求相对较松；（3）检测样品的费用也较便宜。但免疫学方法抗体的获得不易，目前没有商品出售，并且制备也很复杂。由于抗体原因免疫学方法并不能检测所有的同系物，制备的抗体一般是针对毒性较大的几种。即使免疫学方法有不少缺陷，但由于其简便、快速，是大量样本筛选的较好方法，但该法也不能反映生物学效应。对免疫学方法的研究目前主要集中在抗体的制备和检测程序标准化方面。