检测鱼粉中的组胺 试剂盒说明书
来宝网 2015/2/5点击1555次
美国Kernel公司 华南地区总代理 广州测迪生物科技有限公司
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1．试剂盒描述
美国Kernel组胺酶反应检测试剂盒适用于鱼/海鲜、鱼粉、酒、奶中组胺残留的检测。海产品因处理不当会产生组胺。高浓度的组胺会引起鲭鱼中毒。优质金枪鱼的组胺水平低于50ppm。高浓度的组胺可以用酶联免疫吸附试验（ELISA）或液相色谱-质谱（LC-MS）判定。然而，这些传统方法需要非常昂贵的仪器和长时间的样品处理程序。
Kernel组胺酶检测试剂盒采用酶法检测组胺。该试剂盒，主要提供给国际组织和政府监管机构，食品制造商和处理机构，以及质量保证组织，以检测动物体内组胺在食品安全的关系。该试剂盒特点包括：
? 快速，具有高回收率的低成本提取方法。
? 高灵敏度；低检测下限（鱼/海鲜6ppm）。
? 快速(10分钟)，不需要化学衍生或昂贵的仪器，稳定的酶检测方法。
? 高重复性。
2．试剂盒原理
Kernel组胺酶反应检测试剂盒，是用组胺特异性酶测定一种燃料分子化学还原反应。由染料的还原作用引起的颜色变化（在450 nm波长测定其吸收值）测定样品中组胺的含量。
二.警告
实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。
? 不要使用过期的试剂盒。
? 不同批次的试剂盒不要混用。
? 尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。
? 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。
? 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。
? 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。
? 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。
? 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。
? 解冻后的试剂，试剂贮存在冰中或在4 °C条件（除提取缓冲，可存放在室温下） ，以防止试剂盒组件失效。
三. Kernel组胺酶检测试剂盒检测方法
请务必将样品妥善储存。一般来说，样品应冷藏在2-4 °C时不超过1-2天。若长时间不用，样品应在-20 °C下冷藏。冷冻样品使用前要在冰箱或室温解冻，之后方可使用。
3．试剂的准备
重要事项：所有试剂应回温至室温（20 -25°C / 68- 77 °F ）之间; 确保看过"警告"一节。酶分析法测定前应该准备好试剂溶液。所有试剂在使用之前应轻轻翻转混合。计算需要的反映孔的数量和需要试剂的体积。剩余的液体不能倒回试剂原保存管/瓶。废液应倒入废液缸内避免造成其他污染。解冻试剂可以在4 °C条件下保存2周;长时间保存需放入冰箱内。
3.1 反应液的准备
解冻基础反应液、酶混合液以及标准品回温到室温（20 -25°C /68- 77 °F）之间。反转离心管3次以混匀。在洁净的离心管中，混合基础反应液和酶混合液（1:1 ，V/V）。使用下列表格计算出所需的量反应组合。
3.3 酶反应的测试步骤
（1） 样品：加入100μL的稀释后的样品
（2） 组胺标准品：加入50μL的67%甲醇和50uL的标准品于所设定的板孔中（从低浓度到高浓度加入标准品）。（注意：如果使用的方法II,则用50uL的1×缓冲液来代替50uL的67%甲醇）
（3） 每孔添加100 μL的反应液(基础反应液Master Mix和酶混合液Enzyme Mix)。
（4） 室温孵育10分钟。
（5） 450 nm测量吸光度。
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