来宝网 2013/12/17点击3955次
细胞培养被支原体污染是个世界性问题,在细胞培养中支原体感染发生率达到63%。支原体是一类无细胞壁,形态呈高度多形性,为圆形、丝状或梨形,其直径仅有0.13~0.18μm,并且变形能力大,故能通过滤菌器。细胞培养中的急性污染往往容易觉察,而支原体则像慢性drug一般,只要有一个具有增殖能力的支原体就能引起培养体系的污染,杀细胞于无形中,据统计,超过25%的细胞系中感染了支原体,研究者又不能通过可视法对其进行检测,而且它对细胞的生长率影响较小,也不易引起注意,所以研究者并不知晓。
支原体污染发生后危害巨大,能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达,改变细胞、篡改数据,造成实验数据不准确、不稳定或每次实验都得出不同结论或相反的结论,支原体污染不除,实验不可能成功,故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据才有意义。
支原体污染一般来源于血清,实验仪器、培养基或其他试剂蔓延开来。怎样预防和去除支原体污染呢?是否有一种试剂可以同时预防支原体,细菌,真菌的污染呢?
美国GenDEPOT 推出新型的抗生素制剂Cellmaxin。Cellmaxin是一种新型抗生素制剂,是专门保护细胞培养系统预防和防治支原体(mycoplasma)和细菌污染。Cellmaxin Plus是在Cellmaxin的基础上添加了抗真菌成分,三效合一,有效的防治支原体、G-阴性菌、G+阳性菌和真菌,抗性范围更广,不需要额外添加青霉素、链霉素及氨苄霉素等。

表1. Gendepot细胞培养用新型支原体预防&去除试剂Cellmaxin产品
| 产品名称 | 货号 | 规格 | 抗菌谱 |
| Cellmaxin Plus,10.5mg/ml | C3319-006 | 6x1ml | 支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌/真菌 |
| C3319-020 | 20ml | ||
| Cellmaxin'' 10mg/ml | C3314-006 | 6x1ml | 支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌 |
| C3314-020 | 20ml |
表2. Cellmaxin Plus与其他同类进口品牌(A/B/C/D)支原体去除试剂的比较
| 名称 | Cellmaxin Plus | A | B | C | D |
| 有效成分 | 大环内脂类、 喹诺酮类 |
泰妙菌素 二甲胺四环素 |
泰妙菌素 二甲胺四环素弗诺喹酮类 |
喹诺酮类衍生物 | 大环内脂类、 喹诺酮类 |
| 有效浓度 | 5ug/ml | 组分1: 10ug/ml 组分2: 5ug/ml |
1ml/100ml medium | 0.5ug/ml | 12.5~37.5ug/ml''一般使用25ug/ml |
| 作用时间 | 一次加入2周 | 两种两次2周 | 三种试剂,分3次加,循环使用 | 1-2周 |
2周 |
| 去除效果 | 92% | 84% | 90% | 64% | - |
| 抗性支原体 | 2% | 5% | - | 22% | - |
| 产品总量 | 6ml((10mg/ml) | 组分1: 25mg 组分2: 12.5mg |
100 x 10ml | 5ml(50 ug/ml) | 2x 1ml (25mg/ml) |
| 细胞毒性 | 低毒/无毒 | + | +/- | +/- | +/- |
| 可否预防支原体污染 | 可以 | 不确定 | 不确定 | 可以 | 不可以,另配预防试剂 |
表3.细胞培养常用抗生素比较
| 试剂 | 抗菌谱 | 抑菌机理 | 实验用量 |
| Cellmaxin'' 10mg/ml 5mg/ml Macrolide; 5mg/ml Quinolone; |
支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌 | 蛋白合成/DNA合成 | 250ul-1ml/500ml |
| Cellmaxin'' Plus 10mg/ml 5mg/ml Macrolide; 5mg/ml Quinolone; 500ug/ml anfifungal; |
支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌/真菌 | 蛋白合成/DNA合成/膜蛋白酶 | 250ul-1ml/500ml |
| Penicillia-Streptomycin 10000 units/ml Penicillin G; 10''000 ug/ml Streptomycin; |
革兰氏阳性/革兰氏阴性菌 | 细胞壁合成/蛋白合成 | 5ml/500ml |
| Antibiotics-Antimycotisc(100×) 10000units/ml Penicillin G; 10''000 ug/ml Streptomycin; 25ug/ml Ampjotericin B; |
革兰氏阳性/革兰氏阴性菌/真菌 | 细胞壁合成/蛋白合成/细胞膜 | 5ml/500ml |
产品优势和特点:
1、 含有两种有效成分,去除更彻底。
Cellmaxin显著效果有赖于两种独特的抗菌成份。即大环内脂类和喹诺酮类物质,四环素和大环内酯能结合
30S和50S核糖体亚基,从而抑制蛋白质合成,喹诺酮抑制DNA旋转酶。因此可以在细菌DNA复制及蛋白质
合成两个层面上抑制细菌生长,明显增强除菌效果。
2、 无反复感染
喹诺酮可以自由的穿透哺乳动物细胞,可以同时除去游离形式的及真核细胞内部的支原体,这个特点保证了
经过Cellmaxin处理的细胞不会被支原体感染细胞中释放出的支原体反复感染。因此可以避免除菌后细胞内
支原体的反复感染。
3、 无获得性抗性
由于其优越的除菌机制,避免了抗性支原体的产生。
4、使用方便,作用周期短
可以直接加入到培养基中,避免了两类抗生素的分次及循环使用,提高使用效率;维持2周即可彻底去除支
原体。
5、 广谱除菌效果
对细菌的污染同样有效,低浓度时对革兰氏阴性及阳性细菌均有抑制作用
6、作用浓度低,细胞毒性小
10μg/ml可有效处理大部分细菌菌株和部分支原体;一般5-20μg/ml处理支原体、细菌等,对正常真核细胞代
谢不存在明显的毒副作用
表4.Cellmaxin Plus去除&预防支原体用量
| Cellmaxin Plus 支原体去除(20ug/ml ) | ||||||
| 培养皿尺寸 | 35mm plate | 60mm plate | 100mm plate | 100ml flask | 500ml flask | |
| 培养基体积 | 2ml | 5ml | 10ml | 100ml | 500ml | |
| Cellmaxin Plus 体积 | 4ul | 10ul | 20ul | 200ul | 1ml | |
| Cellmaxin Plus 支原体预防(5ug/ml ) | ||||||
| 培养皿尺寸 | 35mm plate | 60mm plate | 100mm plate | 100ml flask | 500ml flask | |
| 培养基体积 | 2ml | 5ml | 10ml | 100ml | 500ml | |
| Cellmaxin Plus 体积 | 1ul | 2.5ul | 5ul | 50ul | 250ul | |