来宝网 2012/8/7点击1777次
Ø PrIEF3000在分离纯化细胞器方面功能。
分离纯化细胞器目前仅使用传统的离心方法:密度梯度离心和超速离心。离心的方法是根据分离组分的密度和其他组分密度的不同来达到分离纯化的目的,得到的样品比较粗糙,当组分密度相同或相似时,是无法分离的。
PRIEF3000可以在传统离心方法的基础上,根据组分所带电荷、分子量、等电点的不同进一步纯化。虽然PRIEF3000目前并不能减少劳动强度,但能使组分纯度大大增加。例如分离线粒体,它能使组分纯度达到95%以上。
基于目前很多客户希望能够得到很纯的细胞器,然后来研究特定细胞器的蛋白质组。
Ø PrIEF3000如何减少蛋白质组的复杂度?
客户一般希望通过减少蛋白质组的复杂度,来发现更多的蛋白。尤其对于血浆蛋白质的研究更是如此。血浆蛋白的成分非常复杂,蛋白浓度差别巨大,跨度达10个数量级。
PRIEF3000可以作为一种样品前处理的手段,将样品根据组分所带电荷、分子量、等电点的不同分离成96个组分,后续再通过其他方法,如质谱,分别对96个组分或特定组分进行分析,从而减少样品复杂度。
Ø PrIEF3000如何富集低丰度蛋白?
现在很多客户,尤其进行肿瘤学研究的客户,在工作中会发现一些很有意义的低丰度蛋白,这些蛋白可能会帮助对肿瘤进行诊断或判断预后。如果能将这些蛋白分离出来,将会有很大的经济效益。但是,由于这些蛋白的丰度很低,传统的凝胶电泳往往看不到他们。 PRIEF3000可以富集低丰度蛋白,给这部分研究提供了一种新的思路和方法。
Ø PrIEF3000在分离膜蛋白方面的功能
膜蛋白疏水性大,在做2D胶时往往产生沉淀。所以,至今尚无膜蛋白的2D胶。PRIEF3000是个纯液相的系统,可以最大程度上避免膜蛋白的沉淀。采用合适的去污剂将蛋白溶解,PRIEF3000可在变性条件下分离蛋白,第一次实现膜蛋白的二维分离。
Ø 与2D胶比较,PRIEF3000的优势在哪里?
2D胶作为目前蛋白质组研究必不可少的工具之一,虽然应用很普遍,但是存在着固有的缺陷:
1) 重复性低,同样的样品,同一个操作者,重复性只有70%;
2) 做质谱需要进行样品回收,回收率大约只有30%;
3) 所需时间长,需要过夜;
PRIEF3000具有高重复性、高回收率,操作时间短等优点,这是传统的2D胶无法比拟的。对于需要进行蛋白鉴定的客户,或许他们会选择购买PRIEF3000。