来宝网 2021/9/21点击1218次
MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit适用于从1-5mL的血浆、血清样本中的提取高质量cfDNA，操作简单、快速。本产品采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的纯化回收游离DNA。提取的核酸产量高，质量稳定可靠，最大限度的去除蛋白等其他抑制物，适用于各种下游应用实验，如荧光定量PCR和二代测序等，兼容手动提取和自动提取流程。 产 品 特 点 ◎ 提取质量高: 总量,纯度均较高,满足后续建库要求； 产 品 优 势 ◎ 提取总量优异 以1 mL人血浆为样本，YEASEN提取总量好于竞品N，其组内稳定性优于竞品Q。 ◎ 抑制性残留物少 qPCR扩增TERT基因，竞品Q（蓝色）、YEASEN（橙色）、竞品N（绿色），与竞品相比，YEASEN扩增曲线无显著差异，表明YEASEN提取试剂盒可获得较为纯净，无扩增抑制物残留的cfDNA。 图2. TERT基因qPCR结果 ◎ 文库产量高 取1ng cfDNA，采用建库试剂盒Hieff NGS® Ultima Pro DNA Library Prep Kit for Illumina®（12201ES08），PCR循环数=14进行建库，文库取2μL电泳，与竞品相比，YEASEN产量及文库大小无差异，性能较为优异。 图4. 1ng cfDNA建库结果 订 购 信 息 产品名称 产品编号 规格 MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit 18381ES50 50 T MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit脱蜡过程不涉及有毒试剂，采用精心优化的缓冲体系，可最大限度的分离纯化高纯度DNA。提取的核酸纯度高，质量稳定可靠，适用于各种下游应用实验，如酶切、PCR、RT-qPCR等。 产 品 特 点 ◎ 安全无毒：采用无毒性脱蜡液脱蜡，不涉及二甲苯等有机试剂； 产 品 优 势 ◎ 提取质量高 以10mg小鼠石蜡包埋组织为样本，100μL洗脱，与竞品相比，YEASEN提取产量无明显差异。其中磁珠法总量、纯度整体优于竞品Q和竞品T。 图6. 各试剂盒 提取FFPE DNA结果 表1. 各试剂盒提取FFPE DNA纯度 试剂盒 260/280 260/230 Q-离心柱 2.04 2.30 2.01 2.24 T-离心柱 1.98 2.34 1.99 2.39 YEASEN-离心柱 2.03 2.04 2.00 2.32 YEASEN-磁珠 1.98 2.30 1.98 2.31 ◎ 抑制性残留物少 电泳扩增内参Gapdh基因，内参扩增无显著差异，抑制性产物少，整体提取质量较优。 ◎ 建库性能优 取50ng FFPE DNA，采用建库试剂盒Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit for Illumina®（12205ES08），PCR循环数=7进行建库，文库进行电泳，分析发现，与竞品相比，YEASEN产量及文库大小无异常，其中YEASEN磁珠法优于竞品。. 图8. 50ng FFPE DNA建库结果 订 购 信 息 产品名称 产品编号 规格 MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit 18371ES60 50 T
cfDNA是指在循环血中，游离于细胞外的部分降解了的机体内源性 DNA，因其在疾病诊断和检测如液体活检，NIPT等方面的巨大潜力，相关的研究和实验在临床中应用日益广泛，且发展极其迅速。cfDNA在健康成年人中浓度大约只有10~30 ng/mL，且片段仅有170 bp左右。从样本采集运输，到血浆获取，再到样本裂解、捕获、清洗、洗脱，最后到下游应用，每一步都有巨大的挑战。
图1. 各试剂盒提取cfDNA结果
图3. TERT基因qPCR扩增Ct值
图5. 1ng cfDNA建库后文库大小分布
肿瘤组织几乎是唯一病人愿意被切下来的组织，也是疾病回顾性研究的最佳研究对象。但受限于医院的保存条件，临床离体的组织容易丧失原有正常的结构和功能。使用福尔马林固定石蜡包埋处理的样本（Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded，FFPE）可以在常温保留很久，所以FFPE就成了医院里最常用的样本。但福尔马林的固定容易使组织中的核酸发生降解以及导致和分子间的交联，因而从石蜡切片中提取出高质量核酸是肿瘤基因检测领域大大的难题。
图7. 提取DNA中Gapdh基因扩增
图9. FFPE DNA建库后片段大小分布
