大鼠GRO/CINC-1试剂盒（ELISA）
【前言简介】
细胞因子诱导的中性粒细胞趋化剂-1（CINC-1）开始是从IL-1β刺激的大鼠肾上皮样细胞（NRK-52E）条件下的培养基中纯化的。渡边富山医学和制药大学的研究小组在1989年确定了编码大鼠CINC-1的氨基酸序列。CINC-1是趋化因子的α（CXC）亚家族中的一员。另外三种大鼠CXC趋化因子（CINC-2α，CINC-2β，CINC-3/MIP-2）已被鉴定出来。CINC-1的蛋白序列与CINC-2α、CINC-2β、CINC-3/MIP-2的蛋白序列同源性为63 - 67%。此外，GROα、GROβ和GROγ与CINC-1的一致性分别为68%、71%和69%。这已经表明，CINCs是人类GROs的大鼠对应物。
【检测原理】
大鼠GRO/CINC-1试剂盒（ELISA）基于固相夹心法原理，利用两种高特异性抗体进行检测。四甲基联苯胺（TMB）作为一种显色原，显色强度与大鼠GRO/CINC-1的量成正比。
【试剂盒组分】
1）微孔板： 96孔，包被抗大鼠GRO/CINC-1兔IgG亲和纯化
2）标记抗体： 30倍浓缩，1x0.4ml，HRP-抗大鼠GRO/CINC-1兔IgG Fab’亲和纯化
3）标准品： 2x0.5ml，重组大鼠GRO/CINC-1
4）EIA缓冲液： 1x30ml
5）标记抗体溶液： 1x12ml
6）底物液： 1x15ml
7）终止液： 1x12ml
8）洗涤缓冲浓缩液： 1x50ml，40倍浓缩
【储存】
大鼠GRO/CINC-1试剂盒（ELISA）应储存于2-8℃中，其效期在试剂盒上注明，不要使用过期试剂。
【试剂制备】
（1）洗涤缓冲液
使用前大鼠GRO/CINC-1试剂盒（ELISA）平衡至室温，并轻轻混合均匀
50mL洗涤缓冲浓缩液+1950mL蒸馏水，混合均匀，得到洗涤缓冲液工作液，稀释后的洗涤缓冲液在冰箱中可储存2周
（2）标记抗体
在一次性试管中用标记抗体溶液30倍稀释标记抗体浓缩液，若使用1条微孔板（8孔），需要800μL标记抗体，即30μL标记抗体浓缩液+870μL标记抗体溶液，混合均匀
应当在使用前进行制备，标记抗体浓缩液应在4℃下密封储存
（3）标准品
向标准品中加入0.5mL蒸馏水使其完全溶解，得到的标准品浓度为600pg/mL。
准备8支试管并向每支试管中加入230μL EIA缓冲液
将230μL重建后的标准品加入试管1中，轻轻混匀；将230μL试管1中溶液加入试管2中，混合均匀。连续2倍稀释制备7个标准品浓度，范围为300 - 4.69pg/mL，试管8浓度为0pg/mL，作为样本空白
【检测步骤】
使用前将所有试剂平衡至室温大约30分钟
（1）确定试剂空白孔，加入100μL EIA缓冲液
（2）确定样本空白孔、样本孔和标准品孔
（3）将100μL样本空白（试管8）加入样本空白孔中
（4）将100μL样品和标准品加入相应的孔中
（5）封板，在37℃下孵育1小时
（6）洗涤微孔板4次，每次加入的洗涤缓冲液超过350μL
（7）将100μL标记抗体加入所有孔中，除了试剂空白孔
（8）封板，在37℃下孵育30分钟
（9）洗涤微孔板5次，每次加入的洗涤缓冲液超过350μL
（10）将100μL底物液加入每个微孔中
（11）室温下避光孵育30分钟
（12）将100μL终止液加入每个微孔中
（13）加入终止液后30分钟内测量450nm处的吸光度
【计算结果】
从所有数据中减去样本空白的吸光度，包括样本和标准品
在对数纸上根据标准品吸光度和浓度绘制标准曲线，从标准曲线上读取未知样本的浓度
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