大肠杆菌宿主细胞蛋白（HCP…

在原核系统中，大肠杆菌（E. coli）是常用于生产重组蛋白质的宿主细胞。使用大肠杆菌作为宿主表达生物的优点是众所周知的。这些产品的生产和纯化过程可能被宿主细胞蛋白（HCPs）污染。这些杂质可能会降低治疗性生物药物的效果并引发毒性或免疫反应。因此，尽可能降低HCP杂质是至关重要的。JTC大肠杆菌HCP试剂盒是基于酶联免疫吸附试验（ELISA）开发的，用于检测治疗物质中的HCP杂质，并评估生物制药产品中的HCP污染，以帮助制造商尽可能地控制HCP的数量。

检测原理：JTC大肠杆菌HCP试剂盒基于夹心式固相ELISA原理。该测定系统利用抗大肠杆菌HCP多克隆抗体进行固相固定（在孔上），并利用抗大肠杆菌HCP多克隆抗体进行抗体-酶（辣根过氧化物酶）结合物溶液。在孵化和洗涤后，允许测试样本与固相抗体反应，然后添加酶结合物，形成大肠杆菌HCP在固相和结合抗体之间的夹心结构。第二步洗涤后，加入3,3′,5,5′-四甲基苯二胺（TMB）溶液并孵育15分钟，产生蓝色。通过添加停止溶液停止颜色发展，颜色变为黄色，并在450 nm处光谱光度测定。使用4参数logistic（4-PL）拟合标准曲线来计算样本中HCP的浓度。大肠杆菌HCP的浓度与测试样本与标准品相比的颜色强度成正比。

试剂盒组分：

1.抗体包被孔（1×96孔板），微孔板孔内包被有抗大肠杆菌HCP多克隆抗体

2.测试缓冲液（1瓶，6毫升），含有稀释样本的溶液，即用即可

3.酶结合物（1瓶，12毫升），含有标记有HRP的抗大肠杆菌HCP多克隆抗体的缓冲液

4.标准品组（1毫升/瓶），含有0, 3, 6, 12, 25, 50和100 ng/mL的大肠杆菌HCP

5.显色底物试剂（1瓶，12毫升），由苯二胺和过氧化氢组成

6.洗涤液（1瓶，50毫升），含有PO4缓冲盐水溶液和0.05%的吐温20作为洗涤剂，浓缩（10倍）

7.停止液（1瓶，12毫升），1摩尔的盐酸溶液

8.硬纸板封口器（1个）

9.宣传册条形码

需自备物品

1. 配有450 nm滤镜的酶标仪（如果可能，630 nm作为参考滤镜）

2.低转速为200 rpm的轨道旋转器

3.精密移液器：100微升

4. 一次性移液管尖

5.蒸馏水

6.吸水纸

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