MDL Western Blot WB检测
蛋白质印迹的发者一般认为是美国斯坦福大学的乔治 斯塔克(Geoge Stark)。在尼尔 伯奈特1eal Bumete 于1981年所著的《分析生物化学》(AnalvticalBiochemisty 中被为Westemn Blot，蛋白免没 Weste B 是将电泳分离后的胞或织总蛋质从凝转移到国相支持NCPVDF 膜上 然后用特性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现己应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
原理:与outhem Blo域Northem Blo亲交方法类似,Westen Bot法采用的是聚胺凝胶电泳 被检测物是蛋白质探”是抗体“显色”用标记的二抗。经过PAGE聚丙烯酷胺凝胶电泳分离的蛋白质样品 转移到固相载体(例如酸纤维素浦膜上,固相载体以非共价键形式吸蛋白质 且能保持电泳分离的多肤类型及其生物学活性不变，以固相载体上的蛋白质感多作为抗原 与对应的抗体起免反应 再与酶或同位素标记的第二抗体起反应 经过庭物原色感放时自员得从检测电泳分离的特导性目的基因表达的蛋白成分。该技术也应用于检测蛋白水平的表达。
Western Blot显色的方法主要有以下几种:
i.自显影
ii. 底物化学发光ECL
ii.底物荧光ECF
iv底物DAB吴色
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用种方法 发表文章通常是用底物化学发光ECL，只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下(二抗用HRP标记)反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带
