兔降钙素原(PCT) ELISA 试剂盒
兔降钙素原(PCT) ELISA 试剂盒 96T/48T
实验原理
1. 抗原抗体反应
ELISA试剂盒中的抗原或抗体被固定在固相载体上，当加入待测样本时，样本中的抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生反应，形成抗原抗体复合物。
2. 酶标记物的结合
将酶标记物与特异性抗体或抗原结合，形成酶标记抗体或抗原。酶标记物在反应中起到催化作用，加速反应进程，提高检测灵敏度。
3. 酶促反应
在酶标记物与抗原抗体复合物结合后，加入底物溶液，底物在酶的催化下发生氧化还原反应，产生颜色变化。颜色深浅与待测样本中的抗原或抗体浓度成正比。
4. 吸光度检测
将反应体中的吸光度进行测量，通过比较标准品溶液与待测样本溶液的吸光度值，即可计算出待测样本中的抗原或抗体浓度。
试剂盒组成
名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗体 | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A | 6mL | 3mL | 无 |
底物B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
兔降钙素原(PCT) ELISA 试剂盒 96T/48T
准备工作
1.孔板室温平衡1小时
2.做好布板图谱
3.样本解冻
4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒
5.准备双蒸水
6.根据样本量配好样本xi释液
7.根据样本量及洗板次数配好洗液
8.若需要提前设置好振板器、洗板器
9.准备足够量的擦手纸
10.根据说明书提示，溶解标准品
11.配制不同浓度的标准品
12.配制质控品
13.根据预实验结果稀释样本
14.准备好封板膜
实验步骤
1. 样品收集与处理
（1）根据需要收集不同种类的样品，如血清、血浆、尿液等。
（2）对于血清和血浆样品，将采集的血液静置一段时间后，离心分离出血清或血浆。
（3）对于尿液样品，收集尿液后，可直接进行检测。
2. 样品稀释
根据试剂盒说明，对需要稀释的样品进行适当比例的稀释。
3. 加样
（1）按照试剂盒说明，分别将标准品、质控品和待测样品加入相应的孔中。
（2）每孔加入50μL，轻轻震荡混匀。
4. 封闭
根据试剂盒说明，加入适量的封闭液，覆盖板孔，并轻轻震荡混匀。封闭液一般为含有一定浓度的非特异性结合配体的溶液，可以降低非特异性结合的影响。
5. 洗涤
（1）将板孔洗涤液加入到每个孔中，轻轻震荡，然后倒掉洗涤液。重复洗涤3次，每次用洗涤液充分洗涤
（2）洗涤后，用纸巾轻轻吸干板孔表面的水分。
6. 酶标二抗加入及孵育
（1）根据试剂盒说明，将酶标二抗加入相应的孔中。
（2）孵育一定时间后，将板孔中的溶液倒掉。
7. 洗涤与显色
（1）重复步骤5的洗涤过程。
（2）加入显色剂，孵育一定时间后，将板孔中的溶液倒掉。
8. 终止反应与读数
（1）加入终止液，终止酶促反应。
（2）用酶标仪在450nm波长处读取各孔的光密度值（OD值）。
兔降钙素原(PCT) ELISA 试剂盒 96T/48T
结果判断
1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
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试剂盒供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。
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