人成纤维细胞无血清培养基A…

一、产品基本信息

二、产品简介

人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell^?）自主研发的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真. .皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维     细胞原代分离、扩增与传代培养，且不含动物血清，内毒素水平低于药典标准（<0.06EU/mL）。本产 品生产过程遵循 ISO9001 体.系,并符合 GMP 指导原则。

三、产品特性

l   无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

l   全程无血清生产，大大降低批次间差异。

l   可用于原代分离。

l   内毒素<0.06EU/ml，远低于中.国药典水平。

四、产品内容

五、相关产品

无血清细胞冻存液（治疗级）（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001006）

人脐带间充质干细胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001003）

人脂肪间充质干细胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001004）

六、实验准备

1. 人成纤维细胞培养基配制

1.1. 37℃快速解冻人成纤维细胞培养基添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融。

1.2. 将添加剂以 10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基中，混匀，即为人成纤维细胞无血清培养基

（AC-1001015）。混合后培养基可在 2-8℃ 稳定储存 2-3 周，不建议使用已配制超过 3 周的培养基。

1.3. 人成纤维细胞无血清培养基可直接应用于人真.皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的    原代分离、扩增与传代培养。

七、操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

1. 人成纤维细胞复苏(10cm dish)

1.1. 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞，迅速放入 37℃水浴快速融解。

1.2. 在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入 5 mL 预温的人成纤维细胞无血清培养基（AC-1001015）。

1.3. 1200rpm 离心 3 min，吸掉上清，加入 10ml 人成纤维细胞无血清培养基重悬细胞。

1.4. 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO₂ 的 37℃恒温细胞培养箱中培养 24 小时后观察细胞状态。

1.5. 24h 后更换新鲜人成纤维细胞无血清培养基继续培养，每 2-3 天更换培养液。

2. 人成纤维细胞传代培养

2.1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到 90%，即可传代。

2.2. 在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入 PBS 溶液清洗一次，加入细胞消化液（AC-1001024） 使之完全覆盖皿/瓶底。

2.3. 室温孵育 4-5 分钟或 37℃孵育 2-4 分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

2.4. 加入消化液 2 倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

1.1. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中，1200 rpm 离心 3 min。

1.2. 弃上清，加入人成纤维细胞无血清培养基，重悬细胞，计数。1：2-1：4 比例传代，或按 2-5x10⁴ cells/cm² 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于 37℃，5%CO₂ 培养箱中培养。

注意：人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关，所以传代时细胞密度不宜过稀。

3. 人成纤维细胞冻存

2.1. 细胞达到 90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS 清洗一次。

2.2. 加入细胞消化液（AC-1001024）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min

分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

2.3. 加入消化液2 倍体积的人成纤维细胞无血清培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞， 并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

2.4. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中，1200 rpm 离心 3 min，吸掉上清。

2.5. 加入适量无血清细胞冻存液（治疗级）（AC-1001006），调整细胞冻存密度在 1×10⁶ cells/mL

左右，每支冻存管分装 1.5-2ml。

2.6. 直接放入-80℃，24h 后转入液氮中长期保存。