人成纤维细胞无血清培养基A…

人成纤维细胞无血清培养基AC-1001015
产品简介
详细介绍
  • 参考报价:电议 产地:上海 品牌:上海埃泽思 型号:AC-1001015 更新时间:2023/10/27

一、产品基本信息

 

产品名称

Applied Cell?人成纤维细胞无血清培养基

货       号

AC-1001015

规       格

500mL

运输保存条件

基础培养基 2-8℃,添加剂-20--80℃

使用范围

人真..皮/肺/心脏等多种组织器官来源成纤维细胞培养

保质期

12 个月

 

二、产品简介

人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技有限公司Applied Cell?)自主研发的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真. .皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维     细胞原代分离、扩增与传代培养,且不含动物血清,内毒素水平低于药典标准(<0.06EU/mL)。本产 品生产过程遵循 ISO9001 体.系,并符合 GMP 指导原则。

 

三、产品特性

l   无外源动物蛋白成分,大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

l   全程无血清生产,大大降低批次间差异。

l   可用于原代分离。

l   内毒素<0.06EU/ml,远低于中.国药典水平。


四、产品内容

 

组分

规格

数量

运输

人成纤维细胞基础培养基

450mL

1 瓶

冰袋

人成纤维细胞添加剂

50mL

1 瓶

干冰

五、相关产品

无血清细胞冻存液(治疗级)Applied Cell?: Cat. no.AC-1001006)

人脐带间充质干细胞Applied Cell?: Cat. no.AC-2001003)

人脂肪间充质干细胞Applied Cell?: Cat. no.AC-2001004)

 

六、实验准备

1. 人成纤维细胞培养基配制

1.1. 37℃快速解冻人成纤维细胞培养基添加剂,快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质,时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀,分装或直接按比例添加到基础培养基中,分装后添加剂立即储存于-20℃-80℃,避免反复冻融。

1.2. 将添加剂以 10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基混匀,即为人成纤维细胞无血清培养基

AC-1001015)。混合后培养基可在 2-8稳定储存 2-3 周,不建议使用已配制超过 3 周的培养基。

1.3. 人成纤维细胞无血清培养基可直接应用于人真.皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的    原代分离、扩增与传代培养。

 

七、操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

1. 人成纤维细胞复苏(10cm dish)

1.1. 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞,迅速放入 37℃水浴快速融解。

1.2. 在生物安全柜或超净台中,将解冻后的细胞悬液缓慢加入 5 mL 预温的人成纤维细胞无血清培养基(AC-1001015)

1.3. 1200rpm 离心 3 min,吸掉上清,加入 10ml 人成纤维细胞无血清培养基重悬细胞。

1.4. 将细胞均匀铺到培养皿中,水平十字振动培养皿使细胞均匀分布,5% CO2  37℃恒温细胞培养箱中培养 24 小时后观察细胞状态。

1.5. 24h 后更换新鲜人成纤维细胞无血清培养基继续培养,每 2-3 天更换培养液。

2. 人成纤维细胞传代培养

2.1. 在显微镜下观察细胞,当细胞融合度达到 90%,即可传代。

2.2. 在超净台/安全柜中,吸掉原有培养基,加入 PBS 溶液清洗一次,加入细胞消化液AC-1001024) 使之完全覆盖皿/瓶底。

2.3. 室温孵育 4-5 分钟或 37℃孵育 2-4 分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

2.4. 加入消化液 2 倍体积的人成纤维细胞培养基,用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

1.1. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中,1200 rpm 离心 3 min

1.2. 弃上清,加入人成纤维细胞无血清培养基,重悬细胞,计数。1:2-1:4 比例传代,或按 2-5x104 cells/cm2 传代,均匀铺在培养皿/瓶中,置于 37℃5%CO2 培养箱中培养。

注意:人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关,所以传代时细胞密度不宜过稀。

3. 人成纤维细胞冻存

2.1. 细胞达到 90%汇合度, 吸掉原有培养基PBS 清洗一次。

2.2. 加入细胞消化液AC-1001024)使之完全覆盖皿/瓶底,室温孵育 4-5min  37℃孵育 2-4min

分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

2.3. 加入消化液2 倍体积的人成纤维细胞无血清培养基,用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞, 并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

2.4. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中,1200 rpm 离心 3 min,吸掉上清。

2.5. 加入适量无血清细胞冻存液(治疗级)(AC-1001006),调整细胞冻存密度在 1×106 cells/mL

左右,每支冻存管分装 1.5-2ml。

2.6. 直接放入-80℃24h 后转入液氮中长期保存。

 


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