THP-1人单核细胞白血病细胞…

THP-1 人单核细胞白血病细胞（STR鉴定）介绍

该细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。

细胞特性

1） 来源：急性单核细胞白血病，单核细胞

2） 形态：单核细胞，悬浮

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。      

THP-1 人单核细胞白血病细胞（STR鉴定）接收后的处理：

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议1：2传代 。

THP-1 人单核细胞白血病细胞（STR鉴定）培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备RPMI-1640（推荐iCell-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；0.05 mM β－qiu基乙醇；双抗，1%。

2） 参考传代比例：传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

3） 参考换液频率：传代时换液

4） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

5） 冻存液：完全培养液95%，DMSO 5%（使用该冻存液后，按照我库的经验复苏存活率约50%，复苏后需要额外培养7-10天才能恢复生长）

6） 【注意事项】：

该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。

1. 您在收到我们提供的用15ml离心管发货的细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以先准备两个新的T25培养瓶，然后将细胞混合均匀后移入两个新的T25培养瓶中，补加培养基到10ml。放入到37℃培养箱中。

2. 您在收到的是用T25培养瓶发货的细胞，请先通过离心的方式收集细胞，然后将细胞重悬加入12ml按照说明书要求配置的完全培养基吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中培养即可。

3. thp-1悬浮细胞。该细胞在培养时更喜欢温和处理，培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换，建议您使用【半换液法】进行传代，添加细胞培养基以稀释细胞至维持密度即可。

4. 细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。FBS不要灭活，如果细胞生长缓慢请尝试使用其他FBS或暂时将FBS浓度增加到20%

5.该细胞的培养液中需添加β-qiu基乙醇（细胞培养级别），若不添加，可能会对细胞状态造成影响。

β-qiu基乙醇的稳定性有限，不可将β-qiu基乙醇添加到完全培养基中长期储存，在每次传代或液体添加时再添加β-qiu基乙醇。

β-qiu基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中，因为在培养基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不应求，而胱氨酸则很多。有些细胞（例如T细胞）无法将半胱氨酸转运到细胞质中，必须将其转化为半胱氨酸。β-qiu基乙醇将胱氨酸还原为可被细胞转运的形式，然后转化为细胞生长所需的半胱氨酸。  β-qiu基乙醇还是一种还原剂，可以分解培养中细胞产生的许多有毒代谢产物，从而改善细胞周围的环境。

6.该细胞对细胞密度较为敏感，培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围（具体请参考细胞说明书）。

7..该细胞冻存后复苏率较低，冻存时请酌情提高细胞量

8.通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完全培养基来维持细胞的生长，每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中，来完成细胞的全换液。

ATCC有关thp-1细胞保持细胞活力的说明

https://www.atcc.org/support/faqs/2ed94/Seeding%20density%20for%20TIB-202.aspx?device=modal

（频繁的细胞计数是监测thp-1的佳方法。这些细胞应该每2至3天通过向烧瓶中简单加入少量新鲜培养基（使它们具有条件培养基）来培养。您不需要每次都离心细胞并重新传代。当在我们的实验室中培养时，到第2天，细胞通常可以扩增到具有更多培养基的更大的烧瓶中。当细胞密度达到8×10 5个活细胞/ ml时需要进行传代。不允许细胞密度超过1×10（6）活细胞/ ml。）

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 收到细胞后次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

 下面T25瓶为类；

1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10E6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

赛百慷（上海）生物技术股份有限公司主要产品和技术服务：

一、原代细胞服务
       各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源；
       多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源；
       原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等；
       原代细胞相关技术服务和整体实验外包服务；

二、细胞株/系服务
       细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书；
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       细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等；

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