酶切点位
5'-A↓GATCT-3'
3'-TCTAG↑A-5'
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
FastCut? BglII | 15049ES60 | 100 T | 165.00 |
产品描述
FastCut?系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FastCut?系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品规格 |
15049-A | FastCut? BglII | 100 μL |
15049-B | 10×FastCut? Buffer | 1 mL |
15049-C | 10×FastCut? Color Buffer | 1 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。
识别位置
5'-A↓GATCT-3'
3'-TCTAG↑A-5'
推荐反应条件
1× FastCut? 缓冲液；
37°C孵育。
失活条件
80°C孵育20 min。
注意事项
1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；
2）受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切受阻；
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；
4）本产品仅作科研用途！
质量控制
1. 功能活性检测：反应温度下，在20 μL反应中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。
2. 超长时间孵育检测：反应温度下，将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。
3. 酶切-连接-再酶切检测：反应温度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切产物，在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
4. 非特异性内切酶活性检测：反应温度下，将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
5. 蓝白斑检测：将含有单一lacZα基因的载体以1 μL酶消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于FastCut?系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1）按如下建议的加样顺序配制反应液（冰上操作）：
组分 | 质粒DNA | PCR产物 | 基因组DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FastCut? Buffer或10×FastCut? Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL（~1 μg） | 10 μL (~0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FastCut? BglII | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×FastCut TM Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。
2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
3）37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60 min（基因组 DNA）。
4）80°C温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。
2. 双酶切或多酶切
1）每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应。
2）所有内切酶的体积总和不得超过总反应的1/10。
3）如果选用的几种内切酶的反应温度不同，应先以温度低的酶开始酶切，再添加温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。
3.质粒的扩大反应
组分 | 体积（20 μL） | 体积（20 μL） | 体积（50 μL） |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
FastCut? BglII | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
10×FastCut? Buffer或10×FastCut? Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
【注】：如果总反应大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。
不同DNA中的识别位点数
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
6 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 11 |
甲基化修饰影响
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 | 序列可能重叠 剪切受阻 |
不同反应缓冲液中的活性
反应缓冲液 | FastCut? Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart? Buffer | Takara QuickCut? Buffer |
活性 | 完全兼容
| 完全兼容
| 完全兼容
| 50% |
【注】：活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应下的检测。
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