产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格/元 |
Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit (Human，100-1,000 ng) 一步快速去除核糖体RNA试剂盒（人） | 12258ES08 | 8 T | 3165 |
12258ES24 | 24 T | 11365 |
12258ES96 | 96 T | 37365 |
产品描述
Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit (Human，100-1,000 ng)利用靶向技术在cDNA合成过程中高特异性地抑制人总RNA中的核糖体RNA的逆转录，而不影响信使RNA (mRNA)、非编码RNA以及环状RNA等非靶RNA的cDNA合成，从而在一链cDNA合成过程中高特异性去除核糖体RNA。这种靶向去除技术相较于传统的RNase H消化法具有耗时短 (3 min)、操作简单（一步操作）和非靶RNA保留完整等优点，极大简化了操作流程和提高了建库效率，可以与市面上各类一链cDNA合成试剂配套。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的cDNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA，可显著提高测序结果中有效数据比例，也可用于其它cDNA下游应用。提供的试剂已经过严格的质量控制和功能验证，最da程度上保证了rRNA去除的稳定性和重复性。
适用范围
适用于人来源的100-1000 ng 总RNA样品；适用于完整或部分降解RNA（如FFPE RNA）样品。
产品组分
产品组份 | 12258ES08 | 12258ES24 | 12258ES96 |
One-Step rRNA Removal Mix | 8 μL | 24 μL | 96 μL |
运输与保存方法
干冰运输，-20°C存放。效期两年。
注意事项
一、关于操作
1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap? 核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
2. RNA样品应不含基因组DNA污染，若样品中有gDNA残留，应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。
3.若样品体积较大，可先进行浓缩。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途！
二、自备材料
1. qRT-PCR质检rRNA去除效率：Hieff? qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) (Cat#11201)或其他等效产品；
2. 其他材料：无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、PCR仪等。
使用方法
一、操作流程
图1.使用快速去除核糖体RNA试剂盒+RNA建库试剂盒进行RNA建库流程
二、操作步骤
方案1：在逆转录中去除rRNA。
1. 使用翌圣生物的Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11119)进行本试剂盒rRNA去除效率测试，其他逆转录试剂盒也可以用于本测试。
2. 逆转录反应配制（20 μL）
RNA不片段化 |
| RNA片段化 |
Total RNA | 100-1000 ng |
| Total RNA | 100-1000 ng |
Random Primers N6 (50 μM) | 1 μL |
| Random Primers N6 (50 μM) | 1 μL |
One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL |
| One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL |
RNase free ddH2O | To 14 μL |
| 5×Hifair? Ⅱ Buffer | 4 μL |
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应： |
| RNase free ddH2O | To 18 μL |
75℃ | 1 min |
| 混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应： |
50℃ | 2 min |
| 94℃（片段化温度和时间可根据需求自行调整） | 5 min |
4℃ | Hold |
| 75℃ | 1 min |
|
|
| 50℃ | 2 min |
上述反应 | 14 μL |
| 4℃ | Hold |
5×Hifair? Ⅱ Buffer | 4 μL |
|
|
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Hifair? Ⅱ Enzyme Mix | 2 μL |
| 上述反应 | 18 μL |
Total | 20 μL |
| Hifair? Ⅱ Enzyme Mix | 2 μL |
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应： |
| Total | 20 μL |
25℃ | 5 min |
| 混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应： |
42℃ | 30 min |
| 25℃ | 5 min |
85℃ | 5 min |
| 42℃ | 15 min |
|
|
| 85℃ | 5 min |
3. qPCR检测rRNA去除效果。
图2. qPCR验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果
方案2：在RNA NGS文库构建中去除rRNA。
1. 使用翌圣生物的Hieff NGS? Dual-mode RNA Library Prep Kit (Cat#12252 for Illumina, Cat#13333for MGI)进行本试剂盒rRNA去除效率测试。
RNA片段化 |
组份 | 体积 |
Total RNA | 100-1000 ng |
2×Frag/Prime Buffer | 8.5 μL |
One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL |
DEPC H2O | to 17 μL |
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应： |
温度 | 时间 |
94℃（片段化温度和时间可根据需求自行调整） | 5 min |
75℃ | 1 min |
50℃ | 2 min |
4℃ | Hold |
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组份 | 体积 |
上述反应 | 17 μL |
Strand Specificity Reagent | 6 μL |
1st Strand Enzyme Mix | 2 μL |
Total | 25 μL |
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应： |
温度 | 时间 |
25℃ | 10 min |
42℃ | 15 min |
70℃ | 15 min |
接Step 2第二链cDNA的合成/末端修复/加A |
图3. 二代测序验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果
2. 使用New England Biolabs的NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina (Cat#E7760)联合本试剂盒进行rRNA去除方案。
RNA片段化 |
组份 | 体积 |
Total RNA | 100-1,000 ng |
First Strand Synthesis Reaction Buffer (5×) | 4 μL |
Random Primers | 1 μL |
One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL |
DEPC H2O | to 10 μL |
混匀后瞬离，按照下列反应程序进行反应： |
温度 | 时间 |
94℃（片段化温度和时间可根据需求自行调整） | 5 min |
75℃ | 1 min |
50℃ | 2 min |
4℃ | Hold |
接下游一链合成 |
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