产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000（rapid lysis） 线性PEI转染试剂（速溶型）MW40000 | 40816ES02 | 100 mg | 655.00 |
40816ES03 | 1 g | 1855.00 |
40816ES08 | 5×1 g | 7255.00 |
产品描述
PEI 40000是一种分子量为40000的高电荷阳离子聚合物，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成复合物，并使该复合物进入细胞中。PEI 40000是一种瞬时转染试剂，细胞毒性低，转染效率高，在HEK293和CHO等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性PEI转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等，转染效率高达80%~90%。
PEI 40000与PEI 25000转染试剂相比，具有很多优点。包括：1. PEI 40000较易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水调成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH调至中性；2. PEI 40000操作简便，更易于使用，且比PEI 25000的转染效果好；3. PEI 25000含有4-11%的丙酰基残留，其能阻止聚合物主链与DNA结合。相较于PEI 25000，PEI 40000是完全脱落的结构，因此其性能始终如一。
本产品为速溶型，溶解迅速，配制方便。
产品性质
中文名（Chinese Name） | 线性聚乙烯亚胺PEI 40000 |
英文名（English Name） | Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000 |
CAS号（CAS No.） | 49533-93-7 |
分子式（Molecular formula） | (CH2CH2NH)n |
分子量（Molecular weight） | 40,000 |
外观（Appearance） | 白色至灰白色固体 |
溶解性（Solubility） | 溶于水，不溶于有机溶剂：苯 |
结构式（Structure） | 
|
运输与保存方法
运输方式：室温运输。
保存方式：粉末在室温或4 oC保存，有效期2年。储存液 在4 oC保存，有效期至少3个月。
注意事项
1）对大多数细胞来而言，每1 μg DNA 使用3.0 μL PEI 40000转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1 μg DNA使用 1.5~4 μL体积线性PEI 40000转染试剂进行优化。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。
3）本产品仅用于科研用途，不可用于人体
储存液配置（1 mg/mL）
1.材料
PEI 40000、Milli-Q? 水/注射用水（WFI）或类似的生物级水、1 mol/L（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。
2.配置储存液（1 mg/mL）
1）于1 L玻璃烧杯，将1g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q?超纯水或其他相当级别的生物用水中，在磁子搅拌器上搅拌均匀。
2）待PEI 40000完全溶解（通常不到5min）；
3）边搅拌边滴加1 mol/L溶液，调节pH为6.90~7.10；
注：如果pH值>7.10，请使用盐酸将pH值调至6.90~7.10；
5）将溶液转入量筒内，并加水定容到1 L。
6）用一次性0.1~0.2 μm PES真空过滤器过滤除菌，即得到1 mg/mL的储存液。
7）根据需要分装并储存在4 °C，至少3个月稳定。
转染操作流程（以6孔板为例）
1.接种细胞：为了提高转染效率，建议在转染前接种细胞，以转染时细胞密度在70%~80%为宜。
2.准备DNA-PEI复合物：按照系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物：
1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA，充分混匀成 DNA稀释液。
注：无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O
2）立刻向100 μL的DNA稀释液中加入4 μL的PEI 40000转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。
3）在室温下孵育10~15 min，使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
3.转染细胞：
1）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。
2）直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。
3）37 ℃，5% CO2培养箱培养，转染后5 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。
4.稳转筛选（可选）
转染24 h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），37 ℃，5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：
培养皿 | 表面积（cm2） | DNA的量（μg） | 转染试剂的量（μL） | 稀释液体积（μL） | 培养基总量 |
96孔板 | 0.3 | 0.1 | 0.1 | 10 | 100 μL |
48孔板 | 0.7 | 0.2 | 0.3 | 20 | 200 μL |
24孔板 | 1.9 | 0.5 | 1 | 50 | 500 μL |
12孔板 | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1mL |
6孔板 | 10 | 2 | 4 | 100 | 2 mL |
25cm2培养瓶 | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 mL |
75cm2培养瓶 | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 mL |
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