冰冻包埋是为了下一步进行冰冻切片的准备工作,需要用到的实验器材有:液氮、锡箔纸、冰冻切片包埋剂OCT、镊子。
冰冻包埋实验步骤:
1、取材当天把所需要包埋的组织放入4%多聚甲醛过夜;
2、将包埋筐放入15%蔗糖溶液过夜(4'C存放),再将包埋筐放入30%蔗糖溶液过夜(4C存放);
3、“沉糖”完成后,可进行冰冻包埋;
4、将包埋组织放于托盘中(托盘用锡箔纸包裹);
5、将托盘放入液氮中,浸没组织,持续3-5s后捞出,如此重复3-4次左右,待脑组织从半透明变为白色即可(组织浸没与液氮的时间不能过长,避免组织碎裂);
6、组织经液氮速冻后立即用锡箔纸包裹(标注实验编号),放入-80°C;
7、切片之前30min将组织从-80°C冰箱中取出,放入-20C冰箱中解冻;
8、解冻后用OCT胶包埋组织(包埋时确保需要切片的那一面朝上) 放入冰冻包埋机中,20min左右后即可切片。
萼片之后结块开始染色等工作。