一、Western Blot 原理及应用
Western Blot 是一种把电泳分离的蛋白组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)上，而后采用抗体作为探针进行特定蛋白检测的技术。
WB主要应用：对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析，旨在鉴别特异性蛋白的类型(如亚型、聚体、剪切体等)和蛋白表达量的变化。
依科生物Western Blot 服务内容：可以从蛋白提取开始，进行包括样本浓度检测、蛋白变性、电泳转印、封闭、抗体孵育及ECL发光，最终进行基于图像灰度值进行定量分析。
依科生物提供的实验报告中包括实验基本流程、蛋白定量原始数据、抗体孵育方式、图像灰度值分析及曝光原始图像。
二、Western Blot 实验流程
1、样本制备:蛋白提取、定量及变性。
2、电泳转印:蛋白SDS-page凝胶电泳后将蛋白转印至PVDF膜或者NC膜
3、封闭：使用封闭液封闭PVDF膜上未结合蛋白的小孔。
4、抗体孵育：一定条件下使一抗与目标蛋白结合，二抗与一抗结合。
5、发光成像：使用化学发光成像进行条带显色。
6、数据处理：使用imageJ等图像处理软件分析图像灰度值。