生物素分子纯化预装柱，1ML…

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML

生物素分子纯化预装柱，1ML

产品信息

产品描述

Streptavidin Agarose Resin 6FF是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂，其作用原理是基于链霉亲和素与生物之间的相互作用，将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上，独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，纯化时需要在变性条件下洗脱；而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在 pH 9.5-11.0 结合，pH 4.0 时洗脱，不需要使用变性剂，所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML是装填了Streptavidin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱，规格1 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如?KTA 等，方便客户操作。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。

生物素或生物素化物质的纯化

结合/洗杂缓冲液：150 mM NaCl，20 mM NaH₂PO₄，pH 7.4

洗脱缓冲液：8 M盐酸胍，pH 1.5

亚氨基生物素标签物质的纯化

结合/洗杂缓冲液：50 mM碳酸铵，0.5 M NaCl，pH 10.0

洗脱缓冲液：50 mM碳酸铵，0.5 M NaCl，pH 4.0

使用方法

【注】样品在上样前最好用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。另外，确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1样品纯化（以?KTA为例）

1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。

6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。

7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

【注】由于盐酸胍的带电性强，会中和SDS的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析（透析可利用透析袋，PBS作为透析液，透析两次，每次1小时，透析液的体积可控制在样本的100倍）。

3 填料清洗

随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

   1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的0.1 M NaOH或6 M盐酸胍或8 M尿素溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

  2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

注意事项

 1）请勿冷冻保存本产品。

 2）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

 3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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