mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase
mRNA Cap2甲基转移酶
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase mRNA Cap2甲基转移酶 | 10616ES84 | 2000 U | 652.00 |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase mRNA Cap2甲基转移酶 | 10616ES92 | 10000 U | 2852.00 |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase mRNA Cap2甲基转移酶 | 10616ES97 | 50000 U | 12352.00 |
产品描述
mRNA Cap2甲基转移酶（mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase）是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5′末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2′-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA，从而形成Cap1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。
产品性质
英文名（English Name） | mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase |
来源（Source） | 重组E.coli |
浓度（Concertation） | 50000 Units/mL |
纯度（Purity） | ≥99%（SDS-PAGE） |
比活（Specific Activity） | ≥1.6×105 U/mg |
储存缓冲液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH8.0，0.1mM EDTA，1mM DTT，100mM NaCl，50%（v/v）甘油，0.1%（v/v）Trion X-100 |
活性单位定义（Unit Definition） | 一单位（U）定义为：在37℃条件下1h内甲基化10pmol的80nt带帽RNA转录物所需的酶量。 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。推荐分装冻存，避免反复冻融。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
10616ES84 | 10616ES92 | 10616ES97 |
10616-A | mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 40 μl | 200 μl | 1 ml |
10616-B | 10x Capping Reaction Buffer | 80 μl | 400 μl | 2 ml |
10616-C | SAM (32 mM) | 40 μl | 200 μl | 1 ml |
使用方法
1、使用RNase-free 水将适量 Capped RNA 稀释至16μl；
2、将稀释的RNA 在65℃条件下加热处理5min，反应后冰上放置 5mi；
3、按下表（1）配置反应体系（适用于10μg以内Capped RNA的甲基化反应）；
4、37℃条件下孵育1h（对与目的片段长度小于200nt RNA，可将孵育时间增加到2h）；
5、10×Capping Buffer的配置如下：500mM Tris-HCl、pH8.0、50mM KCl、10mM MgCl2、10mM DTT。
表1：20μL反应体系配置
体系组分 | 20μl（Total） |
Denatured Capped RNA | 16μl |
10x Capping Reaction Buffer | 2μl |
SAM (4 mM) | 1μl |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 1μl |
注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、用于实验反应的RNA在用之前应进行纯化处理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和盐离子；
3、反应之前推荐65℃加热5min以去除RNA的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂，可将时间延长至10min；
4、SAM试剂在pH 7–8，37°C条件下稳定性较差，需要现用现配。可预先计算好所需SAM的用量，在反应前将32 mM的储备液稀释成4 mM的工作液。为防止SAM降解，工作液应保存于冰上。
HB200516