T7 RNA polymerase(50 U/μL)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
T7 RNA polymerase (50 U/μL) | 10618ES90 | 5000 U | 532.00 |
10618ES96 | 25000 U | 2132.00 |
10618ES97 | 50000 U | 3832.00 |
产品描述
本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。
注：G*为RNA转录的one个碱基。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
10618ES90 (5000 U) | 10618ES96 (25000 U) | 10618ES97 (50000 U) |
10618-A | T7 RNA polymerase (50 U/μL) | 100 μL | 500 μL | 1 mL |
10618-B | 10×Transcription Buffer | 400 μL | 1 mL ×2 | 1 mL ×4 |
注：10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2和100 mM DTT，但不含有NTP，如需请购买本公司NTP set solution 10133。
产品应用
1. 单链 RNA合成（包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA前体，以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针）
2. 以（Cap analog）为引物合成Capped mRNA
酶活定义
在 37℃、pH8.0 的条件下，1小时内使1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期一年。
质量控制
核酸内外切酶残留检测：100 U的本酶和0.6 μg λ DNA-Hind III酶切产物37℃下孵育16 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：100 U的本酶和1 μg 酵母总RNA在37℃下孵育1 h，RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留检测：100 U本品经E.coli 16s rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅做科研用途！
应用实例
1. 按下列体χ配制反应体χ
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus) | 2 | 1× |
CTP / GTP/ ATP/ UTP (100 mM each) | 0.4 each | 2 mM each |
T7 RNA Polymerase (50 U/μL) | 0.5-1 | - |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 | - |
RNase free H2O | Up to 18 | - |
模板DNA | 2 (100 ng-1μg) | - |
注：
① DNA模板需要最hou加入。由于10×Buffer中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
② Buffer和水建议放置到室温，然后开始使用，反应于室温下配制，防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。
③ 若转录长度< 100 nt，模板投入量可增加至2 μg。
④ RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603。
⑤ 为了特定区域的有效转录，建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。
2. 37℃反应1-2个小时（若转录长度≤ 100 nt，增加时间至4-8 h）。
3. 反应结束后，使用2 U DNaseⅠ（无RNase）37℃ 15分钟去除DNA模板。
4. 转录产物纯化：体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化（12602），以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法（具体操作步骤可联系Yeasen索取）。
操作建议
1.DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。
2.转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最jia模板；PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。
3.在20 μL反应体χ中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。
HB210702