HieffNGS®UltimaTMDNA…

HieffNGS®UltimaTMDNALigationModule12604ES24
产品简介
详细介绍
  • 参考报价:3263 产地:上海 品牌:翌圣生物 型号:12604ES24 更新时间:2024/6/3

Hieff NGS? Ultima DNA Ligation Module

快速DNA连接模块

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS? Ultima DNA Ligation Module

快速DNA连接模块

12604ES24

24 T

3263.00

12604ES96

96 T

10863.00

12604ES98

960T

87663.00

产品描述

Hieff NGS? Ultima DNA Ligation Module是针对Illumina?MGI?高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块,其中最大的亮点为本产品采用一款我公司自主研发的高效连接酶Fast T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3-dA DNA片段的两端连接Illumina?MGI?测序平台适用的DNA接头,具有连接效率高、简便、可实现自动化等优势。

本产品已与Hieff NGS? Ultima Endperp MixCat#12605),2×Super Canace? II High-Fidelity Mix for Library AmplificationCat#12621)共同用于DNA文库构建,通过Illumina?高通量平台测序验证其有效性。

本产品已与Hieff NGS? Ultima Endprep MixCat#12605)、2×Ultima HF Amplification Mix for MGI?Cat#13344)共同用于DNA文库构建,通过MGI?高通量平台测序验证其有效性。

本产品中提供的所有试剂组分,都经过严格的质量与功能验证,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

产品组分

产品编号

组分名称

产品编号/规格

12604ES24

12604ES96

12604ES98

12604-A

Fast T4 DNA Ligase

120 μL

480 μL

4.8 mL

12604-B

5×Fast Ligation Buffer

480 μL

960×2 μL

9.6×2 mL

质量控制

Fast T4 DNA Ligase

1. SDS-PAGE纯度:>95%

2. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含5μl本酶和1 μg Hind III-λDNA37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检

测,条带无降解;50 μL反应体系中包含5μl本酶和1 μg T3 DNA37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条

带无降解。

3. RNase活性:5 μl本酶中加入40 ng FAM-RNA及,37°C下孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,条带无降解。

4. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中加入5 μl本酶和1 μg φX174 RF I DNA37°C下孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳

检测,RF II转化比率<10%

5. 核酸外切酶活性:50 μL反应体系中加入至少5 μl本酶和1 μg声振的[3H]DNA105 cpm/μg),37°C下孵育4小时,

释放的放射性<0.1%

6. 功能活性(平末端连接):50 μL反应体系,在1×Fast Ligation Buffer中,加入0.5 μL Fast T4 DNA Ligase18 μg

Hae III φX17416°C孵育7.5分钟。经琼脂糖电泳检测,片段连接率>95%

7. 功能活性(接头连接):50 μL反应体系,在1×Fast Ligation Buffer中,加入0.125 μL Fast T4 DNA Ligase8 nmol

12 bp接头,16°C孵育过夜。经琼脂糖电泳检测,无明显未连接接头。

Fast Ligation Buffer

1. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer1 μg Hind III-λDNA37°C下孵育16小时。经琼

脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer1 μg T3 DNA37°C下孵育16小时。

经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解。

2. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer1 μg φX174 RF I DNA37°C下孵育4小时。经

琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%

       3. RNase活性:在1×Fast Ligation Buffer中加入40 ng FAM-RNA37°C下孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,

条带无降解。

  4. 磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast Ligation Buffer2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C下孵育4

小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存,效期一年。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

1  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

1 μg

10:1

50 ng

100:1

500 ng

20:1

25 ng

200:1

250 ng

40:1

1 ng

200:1

100 ng

100:1

500 pg

400:1

【注】:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15分钟即可。

2  Adapter Ligation体系

名称

体积(μL

dA-tailed DNA

60

5×Fast Ligation Buffer

20*

Fast T4 DNA Ligase

5

DNA Adapter

X**

ddH2O

To 100

【注】:*对于5×Fast Ligation Buffer,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】Input DNA100 ngInput DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?

第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

Input DNA 摩尔数(pmol=100÷0.66×300=0.5 pmol

第二步,计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例;

根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol

第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);

接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol÷接头浓度(15 μmol/L=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL

综上,接头可添加3.4 μL,加1.6 μL水补齐至5 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL

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建库试剂盒

产品编号

规格

Hieff NGS? MaxUp II Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina?

12300ES08/24/96

8/24/96 T

Hieff NGS? Ultima DNA Library Prep Kit for Illumina? 

12199ES08/24/96

8/24/96 T

Hieff NGS? MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina? 

12200ES08/24/96

8/24/96 T

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12206ES08/24/96

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文库构建磁珠

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Hieff NGS? cfDNA Clean Beads100~200 bp

12599ES03/08/56

1/5/60 mL

Hieff NGS? Smarter DNA Clean beads (50 bp以上)

12600ES03/08/56/75

1/5/60/450 mL

Hieff NGS? DNA Selection BeadsSuperior AMPure XP alternative

12601ES03/08/56/75

1/5/60/450 mL

Hieff NGS? RNA Cleaner

12602ES03/08/56/75

1/5/60/450 mL

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12603ES24/96

24/96 T

建库接头

产品编号

规格

Hieff NGS? Complete Adapter Kit for Illumina?, Set 1

12615ES04/16

12×4/12×16 T

Hieff NGS? Complete Adapter Kit for Illumina?, Set 2

12616ES04/16

12×4/12×16 T

Hieff NGS? Complete Adapter Kit for Illumina?, Set 3

12617ES04/16

12×4/12×16 T

Hieff NGS? Complete Adapter Kit for Illumina?, Set 4

12618ES04/16

12×4/12×16 T

Hieff NGS? Tagment Index Kit for Illumina?,(96 Index)

12610ES96

96 T

建库模块

产品编号

规格

Hieff NGS? Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent

12609ES24/96

24/96 T

Hieff NGS? Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

12608ES24/96

24/96 T

Hieff NGS? Ultima DNA Ligation Module

12604ES24/96

24/96 T

2×Super Canace?Ⅱ Uracil High-Fidelity Mix for Library Amplification

12620ES24/96

24/96 T

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12621ES24/96

24/96 T

Hieff NGS? MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)

12253ES08/24/96

8/24/96 T

文库定量

产品编号

规格

Hieff NGS? Library Quantification Kit for Illumina?, qPCR Master Mix

12302ES05

500 T

Hieff NGS? Library Quantification Kit for Illumina?, DNA Standard (1-6)

12307ES09

6×96 μL

dsDNA HS Assay Kit for Qubit? 

12640ES60/76

100/500 T

1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit?

12642ES60/76

100/500 T

多重PCR

产品编号

规格

Hieff? Multiplex PCR Kit

13279ES60/76

100/500 T

2×Hieff NGS? HG Multiplex PCR Master Mix 2×高GC多重PCR预混液

13283ES03/08/50/60/76

1/5×1/50/250/500mL

 

 

HB200803

 


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