Uracil DNA Glycosylase (UDG)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Uracil DNA Glycosylase (UDG) | 10304ES60 | 100 U | 582.00 |
Uracil DNA Glycosylase (UDG) | 10304ES76 | 500 U | 2782.00 |
产品描述
本产品是大肠杆菌（Ecoli）来源的重组尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG），该酶能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。UDG酶常被用于消除PCR扩增引起的气溶胶污染。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
10304ES60 (100 U) | 10304ES76 (500 U) |
10304-A | Uracil DNA Glycosylase (UDG, 1 U/μL) | 100 μL | 500 μL |
产品应用
1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。
酶活定义
以37℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位（U）。
失活方式
85℃，5 min。
运输储存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期一年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性。
质量控制
核酸内外切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg λ DNA-Hind III酶切产物37℃下孵育16 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：10 U的本酶和1 μg HeLa细胞总RNA在37℃下孵育1 h，RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留检测：10 U本品经E.coli 16s rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
酶失活检测：10 U本品经85℃处理5 min，与1 μg含dU的dsDNA模板温育30 min，DNA的电泳谱带不发生变化。
应用实例
1. 按下列体系配制PCR反应液：
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
10×PCR Buffer (Mg2+ Plus) | 5 | 1× |
25 mM MgCl2 | 3 | 1.5 mM |
dUTP (10 mM) | 1 | 0.2 mM |
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each) | 1 | 0.2 mM each |
模板DNA | Optional | - |
引物1 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
引物2 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.5 | 0.05 U/μL |
Uracil DNA Glycosylase (UDG, 1 U/μL) | 1 | 1 U/50 μL |
ddH2O | Up to 50 |
|
注：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mM 之间调整。可选择性掺入0.2 mM dTTP。
2. PCR反应：
反应温度 | 反应时间 | 循环数 | 目的 |
37℃ | 10 min | 1 | 降解含U模板 |
94℃ | 2 min | 1 | UDG酶失活，模板预变性 |
95℃ | 10 sec | 30-35 | 变性 |
60℃ | 20 sec | 退火 |
72℃ | 30 sec/kb | 延伸 |
72℃ | 5 min | 1 | 终延伸 |
注：37℃消化反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。
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