Hieff NGS? UltimaTM Endprep Mix
快速末端修复/A尾添加模块
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGS? UltimaTM Endprep Mix 快速末端修复/A尾添加模块 | 12605ES24 | 24 T | 4233.00 |
12605ES96 | 96 T | 14333.00 |
产品描述
Hieff NGS? UltimaTM Endprep Mix是针对Illumina?与MGI?高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块，具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼容500 pg-1 μg片段化Input DNA，可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5'端磷酸化和3'端加A尾反应，得到5'末端含磷酸基团且3'末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化，即可使用Hieff NGS? UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604）进行文库构建接头连接反应。
本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 24 T | 96 T |
12605 | Endprep Mix | 240 μL | 960 μL |
质量控制
1. SDS-PAGE纯度：>95%。
2. 核酸内切酶活性：50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。
3. 磷酸酶活性：在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对硝基苯磷酸，37°C孵育4小时。经光谱测定法检测，405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。
4. 功能活性：在1×Endprep Mix中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5'和3'突出末端的片段化DNA，25°C孵育20分钟。经毛细管电泳检测，末端修复、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%。
测序验证
本品与Hieff NGS? UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604），2×Super Canace? II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，已通过Illumina?高通量平台测序验证其有效性。
本产品与Hieff NGS? UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604），2× Ultima HF Amplification Mix for MGI? （Cat#13344）共同用于DNA文库构建，通过MGI?高通量平台测序验证其有效性。
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存，有效期1年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 将表1中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。
表1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系
名称 | 体积（μL） |
Fragmented DNA | x |
Endprep Mix | 10 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表2所示反应程序，进行末端修复/dA尾添加反应。
表2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序
温度 | 时间 |
热盖105°C | On |
30°C | 20 min |
72°C | 20 min |
4°C | Hold |
5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS? DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS? UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604）试剂盒，进行接头连接实验。
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