Hieff NGS? Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent
快速片段化/末端修复/A尾添加模块
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGS? Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent 快速片段化/末端修复/A尾添加模块 | 12609ES24 | 24 T | 1462.00 |
12609ES96 | 96 T | 5362.00 |
产品描述
Hieff NGS? Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent是针对Illumina?与MGI?高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS? Fast-PaceTM DNA Ligation Module（Cat#12607）或Hieff NGS? UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604）进行文库构建中接头连接反应。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 24 T | 96 T |
12609 | Smearase? Mix | 240 μL | 960 μL |
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1. 本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。
2. 若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。
3. 对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。
表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表
插入片段主峰大小 | 片段化时间 | 优化范围 |
600 bp | 5 min | 3-8 min |
350 bp | 8 min | 5-12 min |
250 bp | 10 min | 8-15 min |
200 bp | 13 min | 10-20 min |
150 bp | 20 min | 12-25 min |
【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。
4. 参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）
该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。
1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于冰上配制表2反应体系。
表2 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系
名称 | 体积（μL） |
Input DNA | x |
Smearase? Mix | 10 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。
表3 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序
温度 | 时间 |
热盖105°C | On |
4 °C | 1 min* |
30 °C | 3-20 min** |
72 °C | 20 min |
4 °C | Hold |
【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。
5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS? DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS? UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604）或Hieff NGS? Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。
参考实例
使用Hieff NGS? Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切，片段化结果见图1。
图1 Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA样本（不同酶切时间片段化效果检测）
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