Hifair? V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hifair? V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) | 13114ES60 | 100 T | 3062.00 |
Hifair? V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) | 13114ES80 | 1000 T | 24062.00 |
Hifair? V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) | 13114ES92 | 10000 T | 185762.00 |
产品描述
Hifair? V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，本产品含有UDG酶，可有效防止气溶胶污染的风险。
本试剂盒利用耐热Hifair? V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用适配体热启动Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 |
13114ES60 (100 T) | 13114ES80 (1000 T) | 13114ES92 (10000 T) |
13114-A | 2×Hifair? V NCP MP Buffera,b | 1.2 mL | 6 mL×2 | 120 mL |
13114-B | Hifair? V NCP Enzyme Mix (UDG plus) c | 200 μL | 1 mL×2 | 20 mL |
13114-C | RNase Free H2O | 1.2 mL | 6 mL×2 | 120 mL |
【注】a) 2×Hifair? V NCP MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。本组分含有dNTP和dUTP。
b) 不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。
c) Hifair? V NCP Enzyme Mix (UDG plus)主要包含有耐热Hifair? V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、配体法热启动Taq DNA Polymerase和UDG酶。
适用机型
ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;
Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作
反应体系
组分 | 体积（μL） | 体积（μL） | 终浓度 |
2×Hifair? V NCP MP Buffer | 12 | 15 | 1× |
Hifair? V NCP Enzyme Mix (UDG plus) | 2 | 2.5 | - |
Primer/Probe Mix (10 μM) | 1-4 | 1-4 | 0.4 μM |
模板RNA | 1-5 | 1-10 | - |
RNase Free H2O | To 25 | To 30 | - |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.4 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 循环数 |
1 | 逆转录 | 50℃a | 10 min | 1 |
2 | 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
3 | 扩增反应 | 95℃ | 15 sec | 45 |
60℃b | 30 secc |
【注】
a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间10-15 min。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
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Murine RNase inhibitor (40U/μl) 鼠源RNase抑制剂 | 10603ES10 | 10KU | 916.00 |
Murine RNase inhibitor (40U/μl) 鼠源RNase抑制剂 | 10603ES20 | 100KU | 1695.00 |
Murine RNase inhibitor (40U/μl) 鼠源RNase抑制剂 | 10603ES60 | 200KU | 7796.00 |
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Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG | 10303ES76 | 500U | 3083.00 |
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM） | 10128ES72 | 250μL | 253.00 |
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM） | 10128ES80 | 1mL | 853.00 |
HB200210