HB191218
2×Hieff NGS? HG Multiplex PCR Master Mix
2×高GC多重PCR预混液
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
2×Hieff NGS? HG Multiplex PCR Master Mix 2×高GC多重PCR预混液 | 13283ES03 | 1 mL |
13283ES08 | 5×1 mL |
13283ES50 | 50 mL |
13283ES60 | 250 mL |
13283ES76 | 500 mL |
产品描述
本产品适用于多重PCR实验。2×Hieff NGS? HG Multiplex PCR Master Mix以热启动多重PCR酶制剂与2×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可兼容GC含量在25%-70%左右的多重基因扩增，快速便捷地用于多重PCR反应，具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点。本试剂适用于不同多重PCR需求，可用于凝胶电泳鉴定20对以内不同大小片段的多重产物，也可用于进行数百重及以上扩增子的富集。
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃储存，有效期1年。
参考反应体系
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
2×Hieff NGS? HG Multiplex PCR Master Mix | 15 | 1× |
Primer mix | x | 0.1 μM-0.5 μM |
模板DNA | 1 ng-400 ng | - |
无菌超纯水 | up to 30 | - |
【注】 1）上表中DNA量和引物浓度均为推荐用量和浓度，可根据具体实验情况进行调整最适浓度。
2）参考建议：每条引物的浓度可在0.1 μM-0.5 μM范围内进行调整。
3）预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等，无需额外添加。
第一轮扩增程序
循环步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
变性 | 95℃ | 20 sec | 15-45 |
退火延伸 | 60℃ | 4-10 min |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】 在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应（设置热盖温度至105℃左右）。
退火延伸时间：100重PCR推荐4 min；1000重推荐8-10 min需要自己根据引物情况摸索。
PCR产物磁珠纯化: 建议在30 μL 反应体系中加27μL磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。
第二轮扩增程序
循环步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
变性 | 95℃ | 20 sec | 15-45 |
退火 | 60℃ | 1 min |
延伸 | 72℃ | 30 sec |
|
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为1 min，可以在30 s-1 min内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
PCR产物磁珠纯化
建议在30 μL 反应体系中加27μL磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。