Hifair? V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hifair? V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit | 11147ES50 | 50 T | 1453.00 |
Hifair? V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit | 11147ES70 | 200 T | 5493.00 |
Hifair? V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit | 11147ES80 | 1000 T | 21282.00 |
Hifair? V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit | 11147ES92 | 10000 T | 168882.00 |
产品描述
Hifair? V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。
本试剂盒利用耐热Hifair? V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON? HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 |
11147ES50 (50 T) | 11147ES70 (200 T) | 11147ES80 (1000 T) | 11147ES92 (10000 T) |
11147-A | 2×Hifair? V MP Buffer | 500 μL | 1 mL×2 | 10 mL | 100 mL |
11147-B | Hifair? V Enzyme Mix | 50 μL | 200 μL | 1 mL | 10 mL |
11147-C | RNase Free H2O | 500 μL | 1 mL×2 | 10 mL | 100 mL |
【注】1) 2×Hifair? V MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。
2) Hifair? V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair? V Reverse Transcriptase和UNICON? HotStart Taq DNA Polymerase。
适用机型
需添加High Rox适用机型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne?, StepOne Plus?
需添加Low Rox 适用机型： ABI 7500, 7500 Fast, ViiA?7, QuantStudio? 3 and 5, QuantStudio? 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P?, MX3005P?, MX4000P?
不需要Rox校正的仪器型号：
Bio-Rad CFX96?, CFX384?, iCycler iQ?, iQ?5, MyiQ?, MiniOpticon?, Opticon?, Opticon? 2, Chromo4?
Eppendorf Mastercycler? ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene? Q, Rotor-Gene? 3000, Rotor-Gene? 6000
Roche Applied Science LightCycler? 480, LightCycler? 2.0; Lightcycler? 96
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler?; Illumina Eco qPCR
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
反应体系（以20 μL为例）
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
2×Hifair? V MP Buffer | 10 | 1× |
Hifair? V Enzyme Mix | 1 | - |
Primer Mix (10 μM) | 各0.4 | 0.2 μM |
Probe Mix (10 μM) | 各0.2 | 0.1 μM |
模板 RNA | Total RNA 1 pg-1 μg | - |
RNase Free H2O | to 20 μL | - |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 循环数 |
1 | 逆转录 | 50℃a | 15 min | 1 |
2 | 预变性 | 95℃ | 30 sec | 1 |
3 | 扩增反应 | 95℃ | 10 sec | 45 |
60℃b | 30 secc |
【注】
a) 逆转录：对于一些复杂模板或者高GC含量的RNA模板，可将逆转录温度调整至55℃，有利于提高扩增效率。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
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Murine RNase inhibitor (40U/μl) 鼠源RNase抑制剂 | 10603ES10 | 10KU | 916 |
Murine RNase inhibitor (40U/μl) 鼠源RNase抑制剂 | 10603ES20 | 100KU | 1695 |
Murine RNase inhibitor (40U/μl) 鼠源RNase抑制剂 | 10603ES60 | 200KU | 7796 |
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG | 10303ES60 | 100U | 683 |
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG | 10303ES76 | 500U | 3083 |
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM） | 10128ES72 | 250μl | 253 |
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM） | 10128ES80 | 1ml | 853 |
HB200310
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