产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML MBP标签蛋白纯化预装柱，1 ML | 20516ES03 | 1 mL | 4℃ | 358.00 |
20516ES08 | 5×1 mL | 4℃ | 1258.00 |
产品描述
MBPSep Dextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
此外，MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML是装填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱，规格1 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如?KTA等，方便客户操作。
产品性质
基质（Matrix） | 高度交联的6%琼脂糖微球 |
配体（Ligand） | 糊精 |
粒径（Bead size） | 45-165 μm |
载量（Capacity） | ＞10 mg MBP蛋白（80 kDa） |
最大压力（PressureMax） | 0.3 MPa, 3 bar |
pH稳定范围（pH range） | 3-12 |
储存缓冲液（Buffer） | 20%乙醇 |
运输和保存方法
冰袋运输。4℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。
结合/洗杂缓冲液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 7.4
洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA，10 mM 麦芽糖, pH 7.4
注：结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1 mM DTT或10 mM β-巯基乙醇。
使用方法
注：样品在上样前最好用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
1样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
2 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3 填料清洗
随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。
1）3倍柱体积的去离子水；
2）3倍柱体积的0.1%SDS或0.5 M NaOH溶液；
3）3倍柱体积去离子水；
4）3倍柱体积20%乙醇，保存于4℃。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附表 问题及解决方案
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 填料被堵塞 | 清洗树脂。 |
裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤，或离心去除。 |
洗脱组分中无目的蛋白 | 目的蛋白未表达 | 优化实验方案，确保目的蛋白表达 |
样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂 | 样品透析或用结合buffer稀释 |
细胞产生大量的淀粉酶影响结合力 | 培养基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表达 |
融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力 | 更换载体 |
柱子结合时间太短 | 将样品与树脂振荡孵育4℃ 2 h或更长时间 |
洗脱样品较杂 | 目的蛋白降解 | 加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA等 |
平衡/洗杂不充分 | 增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。 |
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