2×HieffCanace®G…

产品信息

产品描述

2×Hieff Canace? Gold PCR Master Mix高保真酶预混液是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲。预混液中添加了Hieff Canace? Gold High-Fidelity DNA Polymerase的热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达10 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。

2×Hieff Canace? Gold PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中不含染料，PCR产物需加入Loading buffer后进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

1）解冻后Master Mix可能出现晶体沉淀，使用前务必涡旋振荡混匀至沉淀消失，不影响试剂性能。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

推荐PCR反应（冰上配制）

【注】：
1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反应中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP终浓度：在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应）：

PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

两步法程序（优先推荐）：                           

三步法程序（常规程序）：

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:         

【注】：
1）预变性温度和时间：推荐温度：98℃，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐温度：60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐温度：72℃。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。
5）不同扩增程序下的特点：
      

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