Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） | 促销价（元） |
Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit | 11143ES50 | 50 T | 1126.00 | 900.00 |
Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit | 11143ES70 | 200 T | 4126.00 | 3300.00 |
产品描述
Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板，使用基因特异性引物，利用耐热Hifair? Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并搭配使用探针和UNICON? HotStart Taq DNA Polymerase，配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。同时Buffer中额外添加了有效抑制非特异性PCR扩增的组分和提高扩增能力的促进因子，使定量PCR结果可以在宽广范围内更加真实有效。
本试剂盒以Kit形式提供，2×Hifair? Ⅲ SG buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等，优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，适用于荧光标记探针的高特异性检测系统。此外，Hifair? UH Ⅲ Enzymes包含比例优化的Hifair? Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON? HotStart Taq DNA Polymerase等。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 |
11143ES50（50 T） | 11143ES70（200 T） |
11143-A | 2×Hifair? Ⅲ SG buffer | 1.25 mL | 1.25 mL×2 |
11143-B | Hifair? UH Ⅲ Enzymes | 125 μL | 250μL |
11143-C | Hieff? 50×High Rox | 50 μL | 100 μL |
11143-D | Hieff? 50×Low Rox | 50 μL | 100 μL |
11143-E | RNase free ddH2O | 1.25 mL | 1.25 mL×2 |
【注】SG buffer为SYBR Green buffer的简写，UH为UNICON-Hifair的简写。
适用机型
High Rox适用机型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus
Low Rox 适用机型： ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P
不需要Rox校正的仪器型号：
Bio-Rad:CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf:Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0,Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
运输与保存方式
冰袋运输。
-20℃避光储存，有效期一年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
反应体系（以20 μL为例）
组分 | 体积（μl） | 终浓度 |
2×Hifair? Ⅲ SG buffer | 10 | 1× |
Hifair? UH Ⅲ Enzymes | 1 | |
Hieff? 50×High Rox or Low Rox | 0.4 | 1× |
Forward Primer (10μM) | 0.4 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 | 0.2 μM |
模板 RNA | Total RNA 1pg-1μg | |
RNA Free H2O | to 20 | |
【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。
b) 参比染料：Rox的添加，可根据不同仪器型号进行选择，具体可参考【适用机型】。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制CT值在20-30之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用20 μl或50 μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 循环数 |
1 | 逆转录 | 42℃ | 10 min | 1 |
2 | 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
3 | 扩增反应 | 95℃ | 10 sec | 40 |
60℃ | 30sec★ |
4 | 熔解曲线 | 仪器默认设置 | 1 |
【注】 a) 逆转录：对于一些极低丰度的基因可以将逆转录时间适当延长至15min。
b) 温度：对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提升灵敏度。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。
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