Hieff NGS? 384 Dual Index Primers Kit for Illumina?
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGS? 384 Dual Index Primers Kit for Illumina? Set1 | 12613ES02 | 96×2 T | 2753.00 |
Hieff NGS? 384 Dual Index Primers Kit for Illumina? Set2 | 12614ES02 | 96×2 T | 2753.00 |
产品描述
Hieff NGS? 384 Dual Index Primers Kit for Illumina?是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer，配合Hieff NGS? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?（Cat#12201）使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品组分
编号 | 名称 | 规格 |
12613ES02 | PE Adapter | 2×336 μL |
i5 Index Primer 1-8 | 60 μL each |
i7 Index Primer 1-12 | 40 μL each |
12614ES02 | PE Adapter | 2×336 μL |
i5 Index Primer 9-16 | 60 μL each |
i7 Index Primer 13-24 | 40 μL each |
运输与保存方法
冰袋运输。
所有组分-20°C保存，有效期1年。
注意事项
1）本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。
2）本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。
3）本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer，可以构建96种不同组合的双端Index标记文库，每个Set可构建192个DNA文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12613中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）与Cat#12614中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。
4）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。
5）使用Hieff NGS? 384 Dual Index Primers Kit for Illumina?试剂盒构建的DNA文库结构如下：
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina? 试剂盒操作说明进行。
接头连接（Adapter Ligation）：
在末端修复产物两端连接特定的Illumina?接头，即Hieff NGS? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?操作步骤3.2。
1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；
表1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩尔比 | 推荐Adapter(15 μM)使用量 |
400 ng | 30:1 | 3.5 μL |
300 ng | 40:1 | 3.5 μL |
200 ng | 60:1 | 3.5 μL |
100 ng | 100:1 | 3.0 μL |
50 ng | 100:1 | 1.5 μL |
【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度（bp）]
2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
3. 配制表2所示反应体系；
表2. Adapter Ligation反应体系
名称 | 体积（μL） |
dA-tailed DNA | 60 |
Ligation Enhancer | 30* |
Quick T4 DNA Ligase | 5 |
PE Adapter | x** |
ddH2O | 5-x |
【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。
**本公司接头浓度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示，计算接头用量。
4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；
5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：
表3. Adapter Ligation反应程序
温度 | 时间 |
热盖 | Off |
20°C | 15 min |
4°C | Hold |
【注】：当Input DNA量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。
连接产物磁珠纯化（Post Ligation Clean Up）
该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物，分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要，详细操作步骤参照Hieff NGS? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?建库试剂盒说明书。
文库扩增（Library Amplification）
该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集，使用本试剂盒接头时，该步骤为必做步骤；
1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系；
表4. PCR扩增反应体系
名称 | 体积（μL） |
2× Super Canace?ⅡHigh-Fidelity Mix | 25 |
i5 Index Primer | 2.5 |
i7 Index Primer | 2.5 |
Adapter Ligated DNA | 20 |
【注】：文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）。
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；
4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表5所示反应程序，进行PCR扩增。
表5. PCR扩增反应程序
温度 | 时间 | 循环数 |
98°C | 1 min | 1 |
98°C | 10 sec | 根据实验需要调整 |
60°C | 30 sec |
72°C | 30 sec |
72°C | 5 min | 1 |
4°C | Hold | - |
序列信息
PE Adapter for Illumina：
5′-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3′
5′-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3′
i5 Index Primer for Illumina：
5′-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3′
i7 Index Primer for Illumina：
5′-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3′
[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列，[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列，各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示：
i5 Index Primers名称 | 引物中Index序列 | 测序对应Index序列 |
i5 index Primer1 | CTCTCTAT | CTCTCTAT |
i5 index Primer2 | TATCCTCT | TATCCTCT |
i5 index Primer3 | GTAAGGAG | GTAAGGAG |
i5 index Primer4 | ACTGCATA | ACTGCATA |
i5 index Primer5 | AAGGAGTA | AAGGAGTA |
i5 index Primer6 | CTAAGCCT | CTAAGCCT |
i5 index Primer7 | CGTCTAAT | CGTCTAAT |
i5 index Primer8 | TCTCTCCG | TCTCTCCG |
i5 index Primer9 | TCGACTAG | TCGACTAG |
i5 index Primer10 | TTCTAGCT | TTCTAGCT |
i5 index Primer11 | CCTAGAGT | CCTAGAGT |
i5 index Primer12 | GCGTAAGA | GCGTAAGA |
i5 index Primer13 | CTATTAAG | CTATTAAG |
i5 index Primer14 | AAGGCTAT | AAGGCTAT |
i5 index Primer15 | GAGCCTTA | GAGCCTTA |
i5 index Primer16 | TTATGCGA | TTATGCGA |
i7 Index Primer名称 | 引物Index序列 | 测序对应Index序列 |
i7 index Primer1 | TCGCCTTA | TAAGGCGA |
i7 index Primer2 | CTAGTACG | CGTACTAG |
i7 index Primer3 | TTCTGCCT | AGGCAGAA |
i7 index Primer4 | GCTCAGGA | TCCTGAGC |
i7 index Primer5 | AGGAGTCC | GGACTCCT |
i7 index Primer6 | CATGCCTA | TAGGCATG |
i7 index Primer7 | GTAGAGAG | CTCTCTAC |
i7 index Primer8 | CAGCCTCG | CGAGGCTG |
i7 index Primer9 | TGCCTCTT | AAGAGGCA |
i7 index Primer10 | TCCTCTAC | GTAGAGGA |
i7 index Primer11 | TCATGAGC | GCTCATGA |
i7 index Primer12 | CCTGAGAT | ATCTCAGG |
i7 index Primer13 | TAGCGAGT | ACTCGCTA |
i7 index Primer14 | GTAGCTCC | GGAGCTAC |
i7 index Primer15 | TACTACGC | GCGTAGTA |
i7 index Primer16 | AGGCTCCG | CGGAGCCT |
i7 index Primer17 | GCAGCGTA | TACGCTGC |
i7 index Primer18 | CTGCGCAT | ATGCGCAG |
i7 index Primer19 | GAGCGCTA | TAGCGCTC |
i7 index Primer20 | CGCTCAGT | ACTGAGCG |
i7 index Primer21 | GTCTTAGG | CCTAAGAC |
i7 index Primer22 | ACTGATCG | CGATCAGT |
i7 index Primer23 | TAGCTGCA | TGCAGCTA |
i7 index Primer24 | GACGTCGA | TCGACGTC |
Hieff NGS? 384 Dual Index Primers Kit for Illumina? Set1(Cat#12613)引物组合方案
i7 Idx i5 Idx | P701 | P702 | P703 | P704 | P705 | P706 | P707 | P708 | P709 | P710 | P711 | P712 |
P501 | P501 P701 | P501 P702 | P501 P703 | P501 P704 | P501 P705 | P501 P706 | P501 P707 | P501 P708 | P501 P709 | P501 P710 | P501 P711 | P501 P712 |
P502 | P502 P701 | P502 P702 | P502 P703 | P502 P704 | P502 P705 | P502 P706 | P502 P707 | P502 P708 | P502 P709 | P502 P710 | P502 P711 | P502 P712 |
P503 | P503 P701 | P503 P702 | P503 P703 | P503 P704 | P503 P705 | P503 P706 | P503 P707 | P503 P708 | P503 P709 | P503 P710 | P503 P711 | P503 P712 |
P504 | P504 P701 | P504 P702 | P504 P703 | P504 P704 | P504 P705 | P504 P706 | P504 P707 | P504 P708 | P504 P709 | P504 P710 | P504 P711 | P504 P712 |
P505 | P505 P701 | P505 P702 | P505 P703 | P505 P704 | P505 P705 | P505 P706 | P505 P707 | P505 P708 | P505 P709 | P505 P710 | P505 P711 | P505 P712 |
P506 | P506 P701 | P506 P702 | P506 P703 | P506 P704 | P506 P705 | P506 P706 | P506 P707 | P506 P708 | P506 P709 | P506 P710 | P506 P711 | P506 P712 |
P507 | P507 P701 | P507 P702 | P507 P703 | P507 P704 | P507 P705 | P507 P706 | P507 P707 | P507 P708 | P507 P709 | P507 P710 | P507 P711 | P507 P712 |
P508 | P508 P701 | P508 P702 | P508 P703 | P508 P704 | P508 P705 | P508 P706 | P508 P707 | P508 P708 | P508 P709 | P508 P710 | P508 P711 | P508 P712 |
Hieff NGS? 384 Dual Index Primer Kit for Illumina? Set2(Cat#12614)引物组合方案
i7 Idx i5 Idx | P713 | P714 | P715 | P716 | P717 | P718 | P719 | P720 | P721 | P722 | P723 | P724 |
P509 | P509 P713 | P509 P714 | P509 P715 | P509 P716 | P509 P717 | P509 P718 | P509 P719 | P509 P720 | P509 P721 | P509 P722 | P509 P723 | P509 P724 |
P510 | P510 P713 | P510 P714 | P510 P715 | P510 P716 | P510 P717 | P510 P718 | P510 P719 | P510 P720 | P510 P721 | P510 P722 | P510 P723 | P510 P724 |
P511 | P511 P713 | P511 P714 | P511 P715 | P511 P716 | P511 P717 | P511 P718 | P511 P719 | P511 P720 | P511 P721 | P511 P722 | P510 P723 | P511 P724 |
P512 | P512 P713 | P512 P714 | P512 P715 | P512 P716 | P512 P717 | P512 P718 | P512 P719 | P512 P720 | P512 P721 | P512 P722 | P512 P723 | P512 P724 |
P513 | P513 P713 | P513 P714 | P513 P715 | P513 P716 | P513 P717 | P513 P718 | P513 P719 | P513 P720 | P513 P721 | P513 P722 | P513 P723 | P513 P724 |
P514 | P514 P713 | P514 P714 | P514 P715 | P514 P716 | P514 P717 | P514 P718 | P514 P719 | P514 P720 | P514 P721 | P514 P722 | P514 P723 | P514 P724 |
P515 | P515 P713 | P515 P714 | P515 P715 | P515 P716 | P515 P717 | P515 P718 | P515 P719 | P515 P720 | P515 P721 | P515 P722 | P515 P723 | P515 P724 |
P516 | P516 P713 | P516 P714 | P516 P715 | P516 P716 | P516 P717 | P516 P718 | P516 P719 | P516 P720 | P516 P721 | P516 P722 | P516 P723 | P516 P724 |
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12618ES04/16 | Hieff NGS? Complete Adapter Kit for Illumina?, Set 4 | 12×4/ 12×16 T | 1256/4536 |
Tn5接头 | 12610ES96 | Hieff NGS? Tagment Index Kit for Illumina?(96 Index) | 96 T | 1365 |
HB190103